DB22T 1821-2013 粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的PCR检测.pdfVIP

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备案号：37940-2013DB22

吉林省地方标准

DB22/T1821—2013

粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的

PCR检测

Detectionoftrichothecenes-producingfungiingrainsbyPCRmethod

2013-05-15发布2013-09-01实施

吉林省质量技术监督局发布

DB22/T1821—2013

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。

本标准由吉林省质量技术监督局提出并归口。

本标准起草单位：吉林省产品质量监督检验院、中华人民共和国吉林出入境检验检疫局。

本标准主要起草人：史艳宇、华蕾、刘金华、王莹、李媛媛、初真林、王伟、刘静秋、周亮、王潇、

刘晓晖、王颖、任明月。

I

DB22/T1821—2013

粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的PCR检测

1范围

本标准规定了粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的PCR检验方法。

本标准适用于粮食中产单端孢霉烯族化合物真菌的快速筛选。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.15食品微生物学检验霉菌和酵母计数

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

WS/T230临床诊断中聚合酶链式反应（PCR）技术的应用

3原理

单端孢霉烯前体（trichodiene）合成酶是催化所有真菌单端孢霉烯族化合物合成反应第一步的酶

类。根据该生化合成过程中的关键基因：单端孢霉烯前体合成酶编码基因tri5的有无来判断待检样品是

否污染了产单端孢霉烯族化合物的真菌。

4试剂和材料

除特别说明以外，所用试剂为分析纯或生化试剂。

4.1水：应符合GB/T6682中一级水的规格。

4.2马铃薯-葡萄糖-琼脂（Potatodextroseagar，PDA）：按GB4789.15规定。

4.3CTAB缓冲液：55mmol/LCTAB、1400mmol/L氯化钠（NaCl）、20mmol/LEDTA、100mmol/LTris，

用10%盐酸（HCl）调pH至8.0，121℃高压灭菌20min，储存于2℃~8℃。

4.4TE缓冲液：10mmol/LTris、150mmol/L氯化钠（NaCl）、2mmol/LEDTA、1%十二烷基磺酸钠，

用10%盐酸（HCl）调pH至8.0，121℃高压灭菌20min，储存于2℃~8℃备用。

4.5RNA酶溶液（5μg/μL）。

4.6蛋白酶K（20mg/mL)。

4.7Tris饱和酚。

4.8酚：三氯甲烷：异戊醇（25：24：1）；三氯甲烷：异戊醇（24：1）。

4.9异丙醇。

4.1070%乙醇。

4.1110×PCR缓冲液：200mmol/LTris-HCl（pH8.4），200mmol/L氯化钾，15mmol/L氯化镁。

4.12引物