细胞融合和单克隆抗体制备.ppt

关于细胞融合和单克隆抗体制备第1页，共26页，星期日，2025年，2月5日考纲要求2.2.2细胞融合与单克隆抗体细胞融合与单克隆抗体ⅡⅠ：对所列知识点要知道其含义，能够在试题所给予的相对简单的情境中识别和使用它们。Ⅱ：理解所列知识和其他相关知识之间的联系和区别，并能在较复杂的情境中综合运用其进行分析、判断、推理和评价。第2页，共26页，星期日，2025年，2月5日回顾：1、抗体的化学本质？2、抗体由什么细胞产生？抗体是机体受抗原刺激后产生的、并能与该抗原发生特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。B淋巴细胞（浆细胞）产生抗体。第3页，共26页，星期日，2025年，2月5日小资料：2010年全球治疗用单克隆抗体药物的销售总额达到440亿美元，如果加上100亿美元的单抗诊断和研究试剂，单抗药物的市场总量达到550亿美元。2011年单抗药物的市场总量已经达到628亿美元。到2015年，全球单克隆抗体药销售额达980亿美元。我国的单克隆抗体药物从无到有，并且在我国医药市场发挥越来越重要的作用。目前我国单抗市场规模每年以50%以上的速度递增。准确识别各种抗原物质，并与特异性结合，可以起到诊断、治疗疾病的效果。第4页，共26页，星期日，2025年，2月5日—把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体。浆细胞—产量低，纯度低，且抗体的特异性差。回顾体液免疫过程思考1：传统的生产抗体方法是？思考2：用该方法生产抗体有什么缺点？第5页，共26页，星期日，2025年，2月5日1个B细胞B细胞群大量专一抗体1.克隆单一的B淋巴细胞，形成B细胞群，需要用到什么技术？2.对B细胞进行克隆化培养可行吗？为什么？3.哪种细胞可以大量增殖呢？4.如何获得既能产生专一抗体，又能无限增殖的细胞呢？如何制备纯度高、特异性强的抗体呢？只能分泌一种特异性抗体设计方案1：单克隆抗体：由单一B细胞克隆产生的高度专一、仅针对某一特定抗原的抗体。第6页，共26页，星期日，2025年，2月5日杂交瘤细胞动物细胞培养技术诱导细胞融合需要什么技术？骨髓瘤细胞+一种特定B细胞大量的化学性质单一的抗体设计方案2：既能分泌抗体又能无限增殖第7页，共26页，星期日，2025年，2月5日细胞膜的流动性灭活病毒、PEG、电激等诱导的手段？原理？动物细胞融合融合成功的标志：细胞核融合第8页，共26页，星期日，2025年，2月5日植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目植物体细胞杂交动物细胞融合融合原理融合的方法诱导方法用途细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性去壁后诱导原生质体融合使细胞分散后诱导细胞融合物理（离心、振荡、电刺激）化学（聚乙二醇）物理、化学方法（同左）灭活的病毒获得杂种植株制备单克隆抗体第9页，共26页，星期日，2025年，2月5日单克隆抗体的制备第10页，共26页，星期日，2025年，2月5日注射抗原B细胞骨髓瘤细胞融合注射抗原的目的是什么？单克隆抗体的制备诱导产生相应的效应B细胞第11页，共26页，星期日，2025年，2月5日诱导细胞融合后，培养基中有几类细胞？B淋巴细胞B淋巴细胞—B淋巴细胞B淋巴细胞—骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞—骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞（杂交瘤细胞）单克隆抗体的制备注射抗原B细胞骨髓瘤细胞融合第12页，共26页，星期日，2025年，2月5日杂交瘤细胞资料分析1：细胞内DNA复制有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。B淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但体外培养时一般不会分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中没有S途径，但能不断分裂增殖。多种杂交瘤细胞思考：请根据资料设计方案选出杂交瘤细胞。选出杂交瘤细胞都能产生同一种抗体吗？为什么？方案：选择培养基培养（即加入氨基嘌呤）结果：杂交瘤细胞第13页，共26页，星期日，2025年，2月5日24孔板资料分析2：（1）多孔细胞培养板：将细胞培养液稀释后，转移到多孔细胞培养板上，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。（2）抗体能够特异性识别抗原并与之结合。思考：请根据资料设计方案选出能产生专一抗体的杂交瘤细胞。方法：克隆化培养+抗体检测结果：能产生专一抗体的杂交瘤细胞第14页，共26页，星期日，2025年，2月5日多种杂交瘤细胞选择性培养基筛选1专一抗体检验阳性克隆化培养筛选2单克隆抗体的制备产生专一抗体的杂交瘤细胞归纳提升：制备单克隆抗体过程中两次筛选的方法