细胞培养的基本原理与技术.ppt

二、超净工作台

超净台的使用与保养：超净台的平均风速保持在0.32-0.48米/秒为宜，过大、过小均不利于保持净化度；使用前最好开启超净台内紫外灯照射10－30分钟使用完毕后要用70%酒精将台面和台内四周擦拭干净，以保证超净台无菌。还要定期用福尔马林熏蒸超净台。第30页，共46页，星期日，2025年，2月5日风向：水平和垂直第31页，共46页，星期日，2025年，2月5日生物安全柜第32页，共46页，星期日，2025年，2月5日第四节常用培养器皿及清洗消毒清洗消毒和灭菌第33页，共46页，星期日，2025年，2月5日关于细胞培养的基本原理与技术第1页，共46页，星期日，2025年，2月5日第一章细胞培养的基本原理与技术体外培养的概念细胞培养的一般过程细胞培养的无菌环境常用培养器皿及清洗消毒第2页，共46页，星期日，2025年，2月5日细胞培养意义

现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术，而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展，细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO细胞作为载体；细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。第3页，共46页，星期日，2025年，2月5日第一节体外培养的概念一、基本概念体外培养（invitroculture），就是将活体结构成分或活的个体从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长和发育的方法。

第4页，共46页，星期日，2025年，2月5日组织培养：是指从生物体内取出活的组织（多指组织块）在体外进行培养的方法。细胞培养：是指将活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养的方法。

器官培养：是指从生物体内取出的器官（一般是胚胎器官）、器官的一部分或器官原基在体外进行培养的方法。

第5页，共46页，星期日，2025年，2月5日胎肾的培养植物组织的培养培养的hela细胞第6页，共46页，星期日，2025年，2月5日人类胚胎干细胞培育出立体视网膜组织培养中的上皮细胞第7页，共46页，星期日，2025年，2月5日二、体内、外细胞的差异和分化1.差异：细胞离体后，失去了神经体液的调节和细胞间的相互影响，生活在缺乏动态平衡相对稳定环境中，易发生如下变化：分化现象减弱形态功能趋于单一化发生转化获得不死性，变成可无限生长的连续细胞系或恶性细胞系第8页，共46页，星期日，2025年，2月5日细胞在体内组织条件的状态体外培养的细胞第9页，共46页，星期日，2025年，2月5日2.分化：体外培养的细胞分化能力并未完全丧失，只是环境的改变，细胞分化的表现和在体内不同细胞是否表现分化,关键在于是否存在使细胞分化的条件Friend细胞（小鼠红白血病细胞）在一定的因素作用下可以合成血红蛋白，血管内皮细胞在类似基膜物质底物上培养时能长成血管状结构第10页，共46页，星期日，2025年，2月5日第11页，共46页，星期日，2025年，2月5日第二节细胞培养的一般过程准备工作取材培养冻存及复苏常用仪器设备第12页，共46页，星期日，2025年，2月5日一、准备工作准备工作的内容包括器皿的清洗、干燥与消毒，培养基与其他试剂的配制、分装及灭菌，无菌室或超净台的清洁与消毒，培养箱及其他仪器的检查与调试。第13页，共46页，星期日，2025年，2月5日二、取材在无菌环境下从机体取出某种组织细胞（视实验目的而定），经过一定的处理（如消化分散细胞、分离等）后接入培养器血中。如是细胞株的扩大培养则无取材这一过程。机体取出的组织细胞的首次培养称为原代培养。

第14页，共46页，星期日，2025年，2月5日第15页，共46页，星期日，2025年，2月5日各种动物和人体内的所有组织都可以用于培养，实际上幼体组织（尤其是胚胎组织）比成年个体的组织容易培养，分化程度低的组织比分化高的容易培养，肿瘤组织比正常组织容易培养。第16页，共46页，星期日，2025年，2月5日三、培养将取得的组织细胞接入培养瓶或培养板中组织块培养，则直接将组织块接入培养器皿底部，几个小时后组织块可贴牢在底部，再加入培养基。细胞培养，一般应在接入培养器皿之前进行细胞计数，按要求以一定的量（以每毫升细胞数表示）接入培养器皿并直接加入培养基。细胞进入培养器皿后，立即放入培养箱中，使细胞尽