细胞培养技术实用篇.ppt

影响细胞贴附的因素细胞类型(附着最强)巨噬细胞一成纤维细胞——上皮细胞——血细胞(最弱)生物因素血清、培养液中的促附着因子机械，物理等其他因素离心：促进附着流动：培养液流动可阻止细胞附着低温：可抑制附着第53页，共112页，星期日，2025年，2月5日促生长因子现已证明，很多激素如胰岛素、氢化可的松等具有促进细胞生长作用。胰岛素能促进细胞利用葡萄糖和氨基酸，用量为1～10U/ml。氢化可的松可促进表皮细胞和乳腺上皮细胞生长，并能提高胶质细胞和成纤维细胞的克隆形成率，用量为10-8～10-7mol/L。人表皮生长因子（hEGF)对大鼠宫颈鳞状上皮细胞(RCEC)有促进增殖的作用。表皮生长因子(EGF)、成纤维细胞生长因子(FGF)等生长调节因子都能促进细胞的生长和增殖。第54页，共112页，星期日，2025年，2月5日五、细胞培养污染及对策培养细胞生长状况常规检查培养液：颜色与透明度的变化细胞生长状况。细胞形态变化。微生物污染第55页，共112页，星期日，2025年，2月5日培养液PH值（颜色变化）变黄，表示PH值下降，细胞生长旺盛，代谢产生的酸性物不断积累导致。变红或紫红色，表示PH值上升，细胞生长停滞、死亡。一般生长稳定的细胞需要2-3天换液1次，生长慢的细胞需要3-4天换液一次。第56页，共112页，星期日，2025年，2月5日细胞换液原代细胞经24小时培养，培养液颜色变浅，表示细胞代谢好。少量换液可刺激细胞生长。通常每周两次，每次换半量或1/5-1/3量。原代细胞第1次换液时，切记不要把培养液全部倒掉。细胞株（系）：条件合适时生长迅速，过夜就变黄，可进行全量换液。这种情况下，最好减少细胞接种数，延长换液的时间。第57页，共112页，星期日，2025年，2月5日细胞生长状况常规应特别注意细胞的生长增殖情况。原代细胞：经历一个适应或潜伏期。细胞系：多为24小时以内。细胞长满瓶底80%时应及时传代。第58页，共112页，星期日，2025年，2月5日细胞形态变化生长良好细胞：透明度大，折光性强，轮廓不清。生长状态不良时，细胞折光性变弱，轮廓增强，胞质中常出现空泡，脂滴，颗粒样物质，细胞之间空隙加大。第59页，共112页，星期日，2025年，2月5日微生物污染培养液颜色与透明度：培养液混浊，液体内漂菌丝或细胞菌。支原体污染，没有明显症状，但细胞生长却明显变缓。第60页，共112页，星期日，2025年，2月5日细胞培养污染的概念不仅仅指微生物，包括所有混入培养环境中对细胞生存有害的成份和造成细胞不纯的异物，因此一般包括微生物(真菌、细菌、病毒和支原体)、化学物质(影响细胞生存、非细胞所需的化学成份)及细胞(非同一种的其它细胞)。其中以微生物污染最多见。另外随着细胞种类增多．不同种细胞交叉污染也时有发生、从而造成细胞不纯。第61页，共112页，星期日，2025年，2月5日污染的途径空气：空气是微生物传播的最主要途径。净化工作台使用过久，滤器受尘埃阻塞，可使净化工作不能正常进行工作时不戴口罩或面对操作野大声讲话、咳嗽等使外界气流过强减少空气流动是防止污染的重要环节。第62页，共112页，星期日，2025年，2月5日污染的途径器材：各种培养器皿及器械清洗消毒不彻底洗刷不干净，污物残留及培养用液等灭菌不彻底CO2温箱．由于温箱内湿度大，温度适宜，取存细胞时不慎将培养液漏出，易使细菌、霉菌孽生，而CO2温箱内是开放式培养．如不定期消毒,可形成污染.第63页，共112页，星期日，2025年，2月5日污染的途径操作无菌观念不强、动作不准确、使用污染的器具或封瓶时不严培养两种以上细胞时，操作不规范、交叉使用吸管或营养液瓶等有可能导致细胞交叉污染。第64页，共112页，星期日，2025年，2月5日污染的途径血清：有些血清在生产时就已被支原体或病毒等污染，即可成为污染的来源。组织样本：原代培养的污染多数来源于组织样本；另一方面手术时使用碘酒消毒，这些混入组织中的碘可以影响细胞生长。第65页，共112页，星期日，2025年，2月5日污染对细胞的影响支原体和病毒对细胞的形态和机能的影响是长期的、缓慢的和潜在的霉菌和细菌繁殖迅速，能在很短时间内压制细胞生长或产生有毒物质杀灭细胞。化学物质污染如重金属或其它化学试剂混入培养液中后，有的毒性较小、如能及时排出，细胞仍可存活．但有些烃化物如多环芳烃等有致突变性，能导致细胞发生转化第66页，共112页，星期日，2025年，2月5日细菌的污染和检测细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染，即使在细胞培养液中加入了抗菌素，也可能因