细菌接种技术黄荔丰讲解.pptx

细菌接种技术省级精品在线开放课程《临床检验技术》黄荔丰

根据培养基的性状可以分为液体、半固体、固体培养基三种。液体培养基固体培养基半固体培养基(动力试验)

液体培养基如肉汤培养基是常用的。主要用于增菌培养，也用于接种纯种观察细菌生长表现。

半固体培养基多用于观察细菌的动力、保存菌种等。动力阴性动力阳性对照

固体培养基一般制成平板，用于微生物分离纯化、鉴定以入药敏试验等。固体培养基在试管中可制成斜面用于菌种的短期保存。

一、平板划线接种技术（分区划线法）（目的是将混有多种细菌的临床标本，经划线分离使其单个分散生长形成单个菌落。）

【器材及试剂的准备】1.接种环2.酒精灯3.普通培养基（普通平板）4.含菌标本5.试管架

【操作过程】1.准备工作（1）将需要的器材及标本放置相应的位置（2）在普通平板的背部做上相应的记号（3）将酒精灯点着

2.接种细菌（1）右手持接种环手柄，将接种环的白金耳在酒精灯火焰上烧灼至红透（手柄下方4-6厘米处也须通过火焰灭菌），待白金耳冷却后，从标本上钩了一白金耳的混合菌液。

（2）左手斜持平板，用手掌托着平板底部，五指固定平板边缘，在酒精灯旁以拇指、食指和中指将平板盖撑开大约30~45°角，尽量保持倾斜或直立姿势（可防止空气中细菌落入培养基），右手持接种环，先将白金耳上的标本涂布于平板培养基表面的一角，并以此为起点划出，划线时使白金耳与平板成30-40度倾斜，利用腕力使白金耳在平板表面轻快滑动划动，每次划线的线条应避免重复。划线范围约占平板的1/4面积作为第一区。

（3）将白金耳置于火焰上再将烧灼，待冷却。转动平板90度，将环通过第一区3-4次（注意不能与起点相接触），一样连续划线，线与线之间尽量不要重叠。第二区的面积也约占平板的1/4。（4）依上法继续划出3、4区。

【清理】1.将相关器材及试剂放回原位。2.用过的一次性物品丢弃至专用医疗垃圾桶内。

二、琼脂斜面接种技术【器材及试剂的准备】1.接种环2.酒精灯3.普通琼脂斜面培养基4.含菌标本5.试管架

【操作过程】1.准备工作（1）将需要的器材及标本放置相应的位置（2）在普通琼脂斜面培养基的管壁上做上相应的记号（3）将酒精灯点着

2.接种细菌（1）以左手大拇指、食指和中指，竖持试管下端，斜面向上，转动棉塞，便于以后拔出。（2）右手持接种环手柄，将白金耳置于火焰中烧灼灭菌后（手柄下方4-6厘米处也须通过火焰灭菌）待冷，从标本上钩取菌液少取。

（3）使用右手小指及手掌移去棉塞，管口通过火焰消毒后，将接种环伸入斜面管内，先从斜面底部到顶端划一条一线，再沿此线自下向上曲线划线。（4）取出接种环，将管口通过火焰，塞好棉塞，再将白金耳烧灼灭菌。

3.送37度培养24小时后观察结果。

【清理】1.将相关器材及试剂放回原位。2.用过的一次性物品丢弃至专用医疗垃圾桶内。

三、半固体培养基接种技术（穿刺培养法）分辨是否有动力

四、液体培养基接种技术细菌在液体培养基中可出现混浊、沉淀及菌膜三种生长现象。

思考题在细菌接种过程中，如何做好生物安全防护？各种接种技术的适用范围？

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