细胞融合与单克隆抗体 (2).ppt

能起抗原作用的各类物质必须具备如下特性：(1)外源性机体以往从未接触过的外源异物或异体；(2)结构性分子量在10，000以上的大小，分子表面有稳定的环状结构基团(而非线状基团)作为识别点；(3)特异性由于抗原有不同的决定簇，产生相应的抗体与抗原间的反应是特异性的。5.1单克隆抗体技术第61页，共118页，星期日，2025年，2月5日抗体：在对抗原刺激的免疫应答中，B淋巴细胞产生的一类糖蛋白,能与相应抗原特异的结合，产生各种免疫效应（生理效应）的球蛋白。5.1单克隆抗体技术第62页，共118页，星期日，2025年，2月5日抗体(Ig):（Immunoglobulin)抗体分类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE抗体结构5.1单克隆抗体技术第63页，共118页，星期日，2025年，2月5日人体内的五种抗体第64页，共118页，星期日，2025年，2月5日抗体作用的机理中和反应聚集反应沉淀反应补体活化5.1单克隆抗体技术第65页，共118页，星期日，2025年，2月5日 每个B淋巴细胞只能产生一种针对它能够识别的特异性抗原决定簇的抗体，而由这一个细胞通过有丝分裂繁殖形成的细胞群称为“克隆”，由这一个克隆系产生的抗体称为单克隆抗体(monoclonalantibody)。5.1单克隆抗体技术一种抗原通常具有多个不同的抗原决定族，因此能刺激多个B淋巴细胞产生相应的单克隆抗体，因此血清中的抗体是针对不同抗原决定族的单克隆抗体混合物，称为多克隆抗体。

第66页，共118页，星期日，2025年，2月5日5.1.1单克隆抗体技术的基本原理Kohler和Milstein于1975年将正常淋巴细胞（如小鼠脾细胞）、瘤细胞（如骨髓瘤）两种细胞杂交而创立了单克隆抗体技术，获1984年诺贝尔奖。5.1单克隆抗体技术GeorgesJ.F.KohlerCésarMilstein利用细胞融合技术，将已免疫过的B细胞与骨髓瘤细胞融合，在由此形成的单个杂种细胞中，B细胞提供产生单一型抗体的遗传信息，瘤细胞提供连续增殖的遗传信息。因此这种杂种细胞既能产生抗体又能无限繁殖。第67页，共118页，星期日，2025年，2月5日1.单克隆抗体技术优势随着在研究上应用日益广泛，对抗体的数量和质量（专一性）要求越来越高数量多:传统的实验动物马,兔等免疫不方便质量高:大动物免疫难以做到单克隆用细胞融合技术获得单克隆抗体综合了两方面优势：淋巴细胞肿瘤:能不断增殖，没有产生专一抗体能力。从脾脏得到淋巴细胞:能产生专一抗体，不能不断增殖。5.1单克隆抗体技术第68页，共118页，星期日，2025年，2月5日高度均一性：纯度很高的均一性抗体高度专一性：只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应大量产生及稳定性：杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代2单克隆抗体的特性5.1单克隆抗体技术第69页，共118页，星期日，2025年，2月5日5.1单克隆抗体技术单克隆抗体(monoclonalantibody，简称McAb)：将能够产生抗体的B淋巴细胞和具有无限增殖力的骨髓瘤细胞融合在一起，形成杂交瘤细胞。杂交瘤细胞既能在体外快速生长，又能持续分泌成分单一的特异性抗体。这种单一类型的只针对某一特定抗原决定簇的抗体分子，就是单克隆抗体。第70页，共118页，星期日，2025年，2月5日3亲本细胞的选择骨髓瘤细胞：1.本身不能分泌抗体2.选择次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶缺陷型（HGPRT-）或者胸腺嘧啶核苷激酶缺陷型（TK-）的骨髓瘤细胞5.1单克隆抗体技术B淋巴细胞：1.经特定抗原免疫能产生目的抗体的动物淋巴细胞2.免疫动物种系要与骨髓瘤细胞系一致或有相近亲源关系第71页，共118页，星期日，2025年，2月5日4融合细胞的选择原理1964年Litterlefield——HAT培养基H—Hypoanthine次黄嘌呤A—Aminopterin氨基喋呤T—Thymidine胸腺嘧啶脱氧核苷5.1单克隆抗体技术第72页，共118页，星期日，2025年，2月5日原理：