项目血浆脂蛋白的测定魏碧娜讲解.ppt

实训血清脂蛋白电泳【操作步骤】：1.血清预染取血清0.18ml于小试管中，加饱和苏丹黑B染液0.02ml，混匀，置室温1小时后。2.制版取普通玻璃将已融化的5g/L琼脂糖溶液均匀涂布在载玻上，室温下静置待凝固。然后距玻片1.5cm处打一小槽。3.加样洗净槽内水分，取预染血清加于样品槽中。4.电泳将已加样的琼脂糖玻片放入电泳槽中，加样品端接负极，用滤纸搭桥。通电，调电压100-120V，电泳20-30分钟。5.结果分析脂类脂肪类脂磷脂(PL)胆固醇(Ch)糖脂胆固醇酯(CE)(甘油三酯、三脂酰甘油、TG)都是双亲性分子:有亲水性（极性）末端和疏水性（非极性）末端血浆中所含的脂类物质总称为血脂。组成：甘油三酯、磷脂、胆固醇、胆固醇酯和游离脂肪酸。脂蛋白是血中脂类的主要运输形式。脂类不溶于水，在水中往往呈乳浊液。正常人的血浆虽含有较多的脂类，但却能保持透明清澈的外观，原因是血浆中的脂类并非以自由状态存在，而是与水溶性强的蛋白质结合形成脂蛋白。脂蛋白结构示意图蛋白质磷脂蛋白质蛋白质胆固醇酯TG胆固醇外周载脂蛋白（如ApoC）磷脂TG胆固醇酯整合载脂蛋白（如ApoB）游离胆固醇血浆脂蛋白的平面结构小结脂蛋白结构：脂蛋白大致为球形颗粒，由两大部分组成，即疏水性的内核和亲水性的外壳。内核由不同量的CE与TG组成，表层由载脂蛋白、PL及FC组成，FC及PL的极性基团向外露在血浆中。血脂与血浆脂蛋白血脂：是血浆中的中性脂肪（甘油三酯）和类脂（磷脂、糖脂、胆固醇、胆固醇酯）的总称脂蛋白：脂类难溶于水，正常血浆脂类物质与蛋白质结合成脂蛋白的形式存在。血浆脂蛋白的组成蛋白质三脂酰甘油磷脂胆固醇胆固醇酯不同血浆脂蛋白组成的比例不同电泳分离法原理：由于各种脂蛋白中载脂蛋白的含量和种类不同，故其表面电荷不同，在电场中具有不同的迁移率。血浆脂蛋白的分类超速离心法：根据脂蛋白在一定密度的介质中漂浮速率不同而进行分离的方法。电泳法：根据不同密度的脂蛋白所含蛋白质的表面电荷不同，利用电泳将其分离，并与血浆蛋白质的迁移率比较以判断其部位。分离方法密度分类法超速离心VLDLCMLDLHDL血浆密度为1.063NaCl溶液脂蛋白电泳分析可分为预染法和电泳后染色法两大类。预染法的操作比较简单，分离效果直观。其操作过程是先将待测血清和苏丹黑染料按一定比例混合进行预染处理，离心后取上清液进行电泳分析。电泳后染色法为用电泳方法先将血浆脂蛋白各成份分开，再用苏丹黑或油红O进行染色。临床上比较常用的是预染法电泳。血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳：α-脂蛋白：0.30-0.40，前β-脂蛋白：0.13-0.25，β-脂蛋白：0.50-0.60，乳糜微粒：阴性。【参考值】Thankyou**