微生物实验课件.ppt

;食品微生物检测菌落总数测定;;;;;;试验环节;1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管，制成1:100的样品匀液。

1.4按6.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次，换用1次1mL无菌吸管或吸头。

1.5根据对样品污染状况的估计，做5个合适稀释度的样品匀液（液体样品可包括原液），在进行10倍递增稀释时，吸取1mL样品匀液于无菌平皿内，每个稀释度做3个平皿。同步，分别吸取1mL空白稀释液加入1个无菌平皿内作空白对照。

1.6及时将15mL～20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基（可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温）倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。;2培养

2.1待琼脂凝固后，将平板翻转，36℃±1℃培养48h±2h。

2.2假如样品中也许具有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时，可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基（约4mL），凝固后翻转平板，按6.2.1条件进行培养。;6.3菌落计数

可用肉眼观测，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和对应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位（colony-formingunits，CFU）表达。

6.3.1选用菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录详细菌落数，不小于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用3个平板的平

均数。

6.3.2其中一种平板有较大片状菌落生长时，则不适宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的二分之一，而其他二分之一中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一种平板菌落数。

6.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一种菌落计数。;试验成果（如图）;;;数据处理：;试验结论：;试验成果分析;试验三出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群

和大肠杆菌检查措施;5.营养琼脂斜面：蛋白胨和牛肉粉提供氮源、维生素、氨基酸和碳源；琼脂是培养基的凝固剂。

6.色氮酸肉汤：胰酪胨提供碳源和氮源满足细菌生长需求

7.MR-VP培养基：月示胨提供碳氮源、维生素和生长因子；葡萄糖为可发酵的糖类；磷酸氢二钾是缓冲剂；氯化钠维持均衡的渗透压。甲基红（MR）试验：肠杆菌科的细菌在糖代谢过程中，分解葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸再被分解，生成甲酸、乙酸、乳酸、琥珀酸。大肠杆菌分解丙酮酸，次生的酸类较多，pH为4.5或更低，甲基红展现红色（阳性）。在产气杆菌的培养液中一部分丙酮酸变为中性的乙酰甲基甲醇，生成的酸类较少，pH在5.4以上，甲基红展现桔黄色（阴性）。乙酰甲基甲醇生成试验（V—P试验）：细菌发酵葡萄糖生成丙酮酸，某些细菌可使丙酮酸脱羧形成乙酰甲基甲醇。在碱性溶液中，乙酰甲基甲醇可在空气中氧化成二乙酰（丁二酮）。二乙酰再与蛋白胨中精氨酸的胍基作用，生成红色化合物。试验中加入α—萘酚是作催化剂，使反应的颜色加深，提高反应的敏感性。

8.结晶紫中性红胆盐琼脂(VRBA)：蛋白胨和酵母粉提供碳氮源和微量元素；乳糖是可发酵的糖类；氯化钠可维持均衡的渗透压；胆盐和结晶紫克制革兰氏阳性菌，尤其克制革兰氏阳性杆菌和粪链球菌；中性红为pH指示剂。;;;革兰氏染色的环节;试验环节;5.大肠茵群的测定

5.1大肠菌群MPN值的测定

5.1.1对每个样品，选择合适的三个持续稀释度的样品稀释液。每个稀释度接种三管月桂基硫酸盐胰蛋白脉(LST)肉汤，每管接种1mL.

5.1.2将接种管置于36士1℃培养48士2h,

5.1.3观测试管的产气状况:检查倒管内与否有气泡产生，记录在24hTa48h内产气的LST肉汤管数。如所有LST肉汤管均未产气，则可汇报为大肠菌群阴性;如有产气者，则深入作证明试验。;5.2大肠菌群的证明试验

5.2.1将所有产气管用直径为3mm的接种环移种到煌绿乳糖胆盐(BGLB)肉汤管中。

5.2.2置BGLB肉汤管于36士1C培养48士2h,

5.2.3记录所有BGLB肉汤管的产气管数。

5.2.4成果汇报:按BGLB肉汤产气管数，查MPN表〔见附录B(补充件)〕汇报每克(毫升)样品中大肠菌群的MPN值。;48h观测成果bglb产气状况;

试验结论：

查MPN表得，每毫升样品中大肠杆菌群的MPN值为:mpn1100

;6粪大肠菌群测定

6.1用直径为3mm的接种环将所有48士2h内产气的LST肉汤管培养物移种于EC肉汤管中。

6.2将所有接种的EC肉汤管在3