DB41T 1729-2018 饲料添加剂葡萄糖氧化酶活力的测定 分光光度法.docxVIP

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DB41

河南省地方标准DB41/T1729—2018

饲料添加剂葡萄糖氧化酶活力的测定分光光度法

2018-11-26发布2019-02-26实施

河南省质量技术监督局发布

DB41/T1729—2018

前言

本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。本标准由河南省畜牧局提出并归口。

本标准起草单位:河南海瑞正检测技术有限公司、河南牧业经济学院、河南省粮油饲料产品质量监督检验中心、河南省兽药饲料监察所、河南省粮油科学研究所有限公司。

本标准主要起草人:李贤、曹明月、文英会、侯林丛、高海军、魏广辉、谭旭信、刘文杰、周江滨、王莉莉。

DB41/T1729—2018

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饲料添加剂葡萄糖氧化酶活力的测定分光光度法

1范围

本标准规定了测定饲料添加剂葡萄糖氧化酶活力的分光光度方法。

本标准适用于饲料添加剂、混合型饲料添加剂及其复合酶。本方法的定量限为60U/g。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。3.1

葡萄糖氧化酶活力

在30℃、pH为6.0的条件下，每分钟能把1μmol的葡萄糖氧化成β-D-葡萄糖酸和过氧化氢所需的酶量，定义为一个葡萄糖氧化酶活力单位（U）。

4原理

在葡萄糖氧化酶的作用下，葡萄糖发生氧化反应，生成葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢与无色的还原型4-氨基安替比林和苯酚在辣根过氧化物酶的催化作用下，生成红色的醌亚胺，生成醌亚胺的量与反应液中葡萄糖氧化酶的活力成正比。通过分光光度计比色测定反应液的吸光度，计算出葡萄糖氧化酶的活力。

5试剂或材料

5.1磷酸缓冲溶液（pH6.0）:分别称取12.1g一水磷酸二氢钠和2.189g（精确至0.001g）二水磷酸氢二钠，加入约800mL水，完全溶解后调节pH为6.0±0.02，定容至1000mL。

5.2葡萄糖溶液（180g/L）:称取18.0g无水葡萄糖，用磷酸缓冲液（5.1）溶解，定容至100mL。

5.34-氨基安替比林溶液（50g/L）:称取5g4-氨基安替比林（精确至0.001g），加水溶解，定容至100mL，棕色试剂瓶存放。

5.4苯酚溶液（11g/L）:称取1.1g苯酚（精确至0.001g），加水溶解，定容至100mL。

5.5辣根过氧化物酶（HRP）液:称取0.0015g（精确至0.0001g）辣根过氧化物酶于5mL离心管中，加入3mL水溶解，备用。

注：除非另有说明，试剂均为分析纯，水为GB/T6682中规定的三级水。

6仪器设备

DB41/T1729—2018

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6.1分样筛:孔径为0.25mm。

6.2分析天平:感量0.1mg。

6.3pH计:精度为±0.01。

6.4磁力搅拌器:附加热功能。

6.5恒温水浴锅:30℃。

6.6秒表:每小时误差不超过5s。

6.7分光光度计:吸光度500nm。

6.8离心机:离心力不低于为2000g。

7试验步骤

7.1试样酶液的制备

固态试样应粉碎或充分碾碎，过0.25mm孔径筛。称取1g试样两份，精确至0.0001g，分别置于200mL锥形瓶中，加入50mL磷酸缓冲溶液（5.1）。摇床或磁力搅拌提取30min，上离心机4000r/min离心5min，取上清液，上清液再用缓冲溶液（5.1）做二次稀释，使稀释后的待测酶液中葡糖糖氧化酶活力控制在6U/mL～10U/mL之间。

7.2测定

取3支试管，分别移取0.2mL辣根过氧化物酶液（5.5），加入4mL磷酸缓冲液（5.1），振摇3s，加入0.6mL葡萄糖溶液（5.2），振摇3s，加入0.8mL苯酚溶液（5.4），振摇3s，再加入0.2mL4-氨基安替比林溶液（5.3），振荡混匀。30℃±0.2℃水浴5min，取出。

向其中1支试管中加入0.2mL水，作为空白调零。

向另外2支试管中加入0.2mL试样溶液，振荡混合，立即用1cm比色皿，在500nm处测定吸光度为A0，再准确