实训总胆固醇TC检测试剂盒酶法操作步骤结果计算讲解.ppt

实训总胆固醇(TC)检测试剂盒(酶法)【操作步骤】：加入物空白（B）标准（S）标本（U）工作液（ml）2.72.72.7蒸馏水(μl)60--校准液（μl）-60-待测标本（μl）--60混匀，37℃孵育10分钟，于波长540nm处读取各管的吸光度△A值。【结果计算】：样品中TRIG浓度（mmol/L）=△AU/△AS×CS(mmol/L)总胆固醇=胆固醇+胆固醇酯胆固醇是双亲性分子，其极性的羟基与非极性的脂肪酸链间有固醇环相连；3胆固醇酯是亲脂性（既疏水性）分子CEH-COD-PAP法——最普遍胆固醇酯+H2O胆固醇+游离脂肪酸CEH（胆固醇酯酶）胆固醇+O2△4-胆甾烯酮+H2O2COD(胆固醇氧化酶）H2O2+4-氨基安基比林+酚醌亚胺染料+2H2OPOD（过氧化物酶）Trinder反应测定原理酶测定法特点：常规测定中现已广泛应用酶法，酶法具有特异性好，精密度和灵敏度都能很好地满足临床实验室的要求，既可以手工操作，也适合自动分析，但酶法测定中出现了不同程度的基质效应。采用酶反应原理的干化学法颇为实用，其缺点是价格高，精密度差。胆固醇的酶测定法始于70年代。由于操作简便，试剂无腐蚀性，特别适用于自动生化分析，目前已成为测定胆固醇的主要方法。胆固醇酶测定法的试剂中，除了上述三种酶、酚和4-氨基安替比林外，还有维持pH恒定的缓冲液、胆酸钠、表面活性剂以及稳定剂等。胆酸钠是为了提高胆固醇酯酶的活性表面活性剂的作用是促进胆固醇从脂蛋白中释放出来评价：主要缺点是：优点：本法灵敏度高、准确度高、精密度好，线性范围宽。①某些胆固醇酯酶对胆固醇酯的水解不完全，不能用纯胆固醇结晶以有机溶剂配制的溶液作为TC分析的校准液，而应以准确定值的血清作为标准，此校准液（品）相当于三级标准。②表面活性剂，如吐温-40可以干扰胆固醇酯酶的作用，而聚乙烯醇6000可使结果提高1％～2％；③本法具有氧化酶反应途径的共同缺陷，易受到一些还原性物质如尿酸、胆红素、维生素C和谷胱甘肽等的干扰。【参考值】血清总胆固醇合适范围：≤5.20mmol/L(200mg/dl)，边缘升高：5.23～5.69mmol/L(201～219mg/dl)，升高：≥5.72mmol/L(220mg/dl)。影响TC水平的因素①年龄与性别；②长期的高胆固醇、高饱和脂肪酸和高热量饮食可使TC增高；③遗传因素；④其它：如缺少运动、脑力劳动、精神紧张等可能使TC升高。TC除了作为高胆固醇血症的诊断指标之外，不能作为其它任何疾病的诊断指标，对于动脉粥样硬化和冠心病而言，TC是一个明确的危险因子，与冠心病的发病率呈正相关。【临床意义】高TC血症：原发和继发低TC血症：原发和继发Thankyou