食品检验工培训蛋白质.ppt

式中W—蛋白质的质量分数，%；c—盐酸标准液的浓度，mol/L；V1—空白滴定消耗标准液量，mL；V2—试剂滴定消耗标准液量，mL；m—样品质量，g；0.014—氮的毫摩尔质量，g/mmol；F—蛋白质系数。(6)结果计算第23页，共56页，星期日，2025年，2月5日2.2微量凯氏定氮法(1)原理微量凯氏定氮法的原理与操作方法，与常量法基本相同，所不同的是样品质量及试剂用量较少，且有一套适于微量测定的定型仪器——微量凯氏定氮器。第24页，共56页，星期日，2025年，2月5日第25页，共56页，星期日，2025年，2月5日①100ml凯氏烧瓶。②微量凯氏定氮器。(2)仪器第26页，共56页，星期日，2025年，2月5日①20g/L硼酸溶液。?②400g/L氢氧化钠。③1g/L甲基红乙醇溶液与1g/L溴甲酚绿乙醇溶液，临用时按1：5混合。④0.01000mol/L盐酸标准溶液⑤其他试剂同常量法。(3)试剂第27页，共56页，星期日，2025年，2月5日①样品消化：样品消化步骤同常量法。将消化完全的消化液冷却后，完全转入100容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀。(4)测定方法第28页，共56页，星期日，2025年，2月5日②蒸馏按图安装好微量定氮蒸馏装置。于水蒸气发生瓶内装水至2/3容积处，加甲基橙指示剂数滴及硫酸数毫升，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。在接受瓶内加入10ml40g/L硼酸及2滴混合指示剂，将冷凝管下端插入液面以下。第29页，共56页，星期日，2025年，2月5日吸取10.00ml样品消化稀释液，由进样漏斗进入反应室，以少量水冲洗进样漏斗，并流入反应室。再从进样口加入400g/L氢氧化钠10ml使溶液呈强碱性，用少量蒸馏水洗漏斗数次，盖塞，进行水蒸气蒸馏。冷凝管下端预先插入盛有10mL4%（或2%）硼酸吸收液,蒸馏至吸收液中所加的混合指示剂变为绿色开始记时，继续蒸馏10min后，将冷凝管尖端提离液面再蒸馏1min，用蒸馏水冲洗冷凝管尖端后停止蒸馏。第30页，共56页，星期日，2025年，2月5日③滴定取下接受瓶，以0.01000mol/L盐酸标准溶液滴定至微红色为终点。第31页，共56页，星期日，2025年，2月5日(5)结果计算式中W—蛋白质的质量分数，%；V0—滴定空白蒸馏液消耗盐酸标准液体积，mL；V1—滴定样品蒸馏液消耗盐酸标准液体积，mL；V2—蒸馏时吸取样品稀释液体积，mL；C—盐酸标准液的浓度，mol/L；0.014—氮的毫摩尔质量，g/mmol；F—蛋白质系数；m—样品质量，g。第32页，共56页，星期日，2025年，2月5日2.3样品的分解条件（1）K2SO4或Na2SO4：提高溶液的沸点（2）催化剂CuSO4氧化汞和汞良好的催化剂，但剧毒；硒粉（3）氧化剂过氧化氢第33页，共56页，星期日，2025年，2月5日硫酸钾加入硫酸钾可以提高溶液的沸点而加快有机物的分解，它与硫酸钾作用生成硫酸氢钾可提高反应温度一般纯硫酸的沸点在340摄氏度左右，而添加硫酸钾后，可使温度提高到4000C以上，原因主要在于随着消化过程中硫酸不断地被分解，水分不断逸出而使硫酸钾浓度增大，故沸点升高，其反应式如下：K2SO4+H2SO4=2KHSO42KHSO4=K2SO4+H2O↑+SO3但硫酸钾加入量不能太大，否则消化体系温度过高，又会引起已生成的铵盐发生热分解而造成损失：（NH4）2SO4=NH3↑+(NH4)HSO42(NH4)HSO4=2NH3↑+2SO3↑+2H2O除硫酸钾外也可加入硫酸钠，氯化钾等盐类来提高沸点，但效果不如硫酸钾。第34页，共56页，星期日，2025年，2月5日硫酸铜CuSO4①催化剂2CuSO4=CuSO4+SO2↑+O2