《牛奶中磺胺类药物的测定 高效液相色谱-串联质谱法》.docx

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牛奶中22种磺胺类残留量的测定液相色谱-串联质谱法

1范围

本文件规定了牛奶中磺胺类抗生素（磺胺醋酰、磺胺苯酰、磺胺氯哒嗪、磺胺二甲基嘧啶、磺胺地索辛、磺胺多辛、磺胺嘧啶、磺胺异恶唑、磺胺脒、磺胺索嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲唑、磺胺甲氧嗪、磺胺甲嘧啶、磺胺甲噻二唑、磺胺甲恶唑、磺胺苯吡唑、磺胺吡啶、磺胺喹恶啉、磺胺噻唑、甲氧苄啶）的液相色谱-串联质谱检测方法。

本文件适用牛奶中22种磺胺类的测定。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法

3术语和定义

本文件没有需要界定的术语和定义。

4原理

试样经1%的甲酸乙腈溶液提取，经分散固相萃取净化，反相色谱柱分离，供液相色谱-串联质谱仪测定，外标法定量。

5试剂和材料

本方法所用的试剂，除另有规定外，均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。

5.1试剂

5.1.1乙腈：色谱纯。5.1.2甲酸：优级纯。5.1.3氯化钠：分析纯

5.1.4十八烷基（C18）粉末：粒径50μm。

5.1.5N-丙基乙二胺(N-primarysecondaryamine,PSA)粉末：粒径50μm。

5.1.61%甲酸乙腈：取10.0mL甲酸（5.1.2），用乙腈（5.1.1）定容到1000mL，摇匀。

5.1.70.1%甲酸乙腈：取1mL甲酸（5.1.2），用乙腈（5.1.1）溶解定容到1000mL，摇匀。5.1.815%甲酸乙腈：取150mL甲酸（5.1.2），用水溶解定容到1000mL，摇匀。

5.1.90.1%甲酸水：取1mL甲酸（5.1.2），用水溶解定容到1000mL，摇匀。

5.2标准品

22种磺胺标准品名称、化学分子式和CAS号见附录表A。

5.3标准溶液配制

T/NAIAXXX—2025

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5.3.1标准储备液（1.0mg/mL）：分别准确称取22种磺胺标准物质适量，用乙腈(5.1.1)溶解并定容至10.0mL容量瓶中，避光冷冻贮存，保存3个月。

5.3.2混合标准储备液（10.0μg/mL）：分别移取22种标准储备液100μL，混合后用乙腈(5.1.1)稀释得到10.0μg/mL的混合标准储备溶液，避光冷冻贮存，保存1个月。

5.3.3混合标准工作溶液：分别准确吸取不同体积混合标准储备液，用空白基质定容至1.0mL，配制成浓度为1.0~200.0ng/mL的标准工作溶液，临用现配。

6仪器和设备

6.1液相色谱-串联质谱仪：配备电喷雾离子源。6.2天平：感量0.00001g和0.01g。

6.3涡旋混合器。

6.4高速离心机：最大转速8000r/min。6.5超声波清洗器。

6.6氮吹仪。

6.7有机微孔滤膜，孔径0.22μm，或相当者。

7分析步骤

7.1试样制备

取适量样品混合均匀，冷藏保存。

7.2试液的提取

称取5.0g试样（精确到0.01g），置于50mL具塞离心管中，加入10g氯化钠（5.1.3）和20mL甲酸乙腈（5.1.6），高速涡旋5min，8000r/min离心5min，取上清液；残渣再加20mL的甲酸乙腈（5.1.6）重复提取一次，合并上清液，用15%的甲酸乙腈（5.1.8）定容至50mL，待净化。移取5.0mL上清液至内含80mgC18（5.1.4）和50mgPSA（5.1.5）离心管中，涡旋5min，8000r/min离心5min，吸取上清液氮吹至近干，1.0mL初始流动相复溶，过0.22μm滤膜（6.7），供液相色谱-串联质谱仪测定。

7.3仪器参考条件

7.3.1液相色谱参考条件

a）色谱柱：C18，2.1mm×150mm，粒径3.5μm或性能相当。

b）柱温：30℃。

c）流动相：A：0.1%的甲酸溶液（5.1.9），B：0.1%甲酸乙腈溶液（5.1.7）；梯度洗脱见表1。

d）流速：0.3mL/min。e）进样量：5μL。

T/NAIAXXX—2025

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表1流动相及梯度洗脱条件

时间/min

流速/（mL/min）

流动相A/%

流动相B/%

0.00

0.3

90

10

3.00

0.3

90

10

3.01

0.3

50

50

8.00

0.3

30

70

12.00

0.3

10

90

12.01

0.3

90

10

15.00

0.3