液相色谱分析仪法.ppt

*（二）工作原理储液器中的流动相被高压泵打入系统,样品溶液经进样器进入流动相,被流动相载入色谱柱(固定相)内,由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数,在两相中作相对运动时,经过反复多次的吸附-解吸的分配过程,各组分在移动速度上产生较大的差别,被分离成单个组分依次从柱内流出,通过检测器时,样品浓度被转换成电信号传送到记录仪,数据以图谱形式打印出来。第30页，共66页，星期日，2025年，2月5日*五.流程及主要部件

processandmainassemblyofHPLC1.工作流程：高压泵将样品由流动相带入色谱柱分离后，经检测器将光信号转变为电信号并放大，最后以图谱的形式显示在工作站荧屏上。第31页，共66页，星期日，2025年，2月5日*2.主要部件(1)高压输液泵：有恒流泵和恒压泵两种。主要部件之一，压力：150～350×105Pa。为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相（10μm），当液体的流动相高速通过时，将产生很高的压力，因此高压、高速是高效液相色谱的特点之一。应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性（动画）第32页，共66页，星期日，2025年，2月5日*泵的使用和维护注意事项①防止任何固体微粒进入泵体:过滤流动相②流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内过夜或更长时间。否则由于溶液的静置，可能析出盐的微细晶体，损坏密封环和柱塞等③泵工作时要留心防止溶剂瓶内的流动相被用完，否则空泵运转会磨损柱塞、缸体或密封环，最终产生漏液。④输液泵的工作压力决不要超过规定的最高压力，否则会使高压密封环变形，产生漏液。⑤流动相必须先脱气，以免在泵内产生气泡，影响流量的稳定性第33页，共66页，星期日，2025年，2月5日*(2)梯度淋洗装置梯度洗脱就是在分离过程中使用两种或两种以上不同极性的溶剂按一定程序连续改变它们之间的比例，从而使流动相的强度、极性、pH值或离子强度相应地变化，达到提高分离效果，缩短分析时间的目的。梯度洗脱装置分为两类：一类是外梯度装置（又称低压梯度）。一类是内梯度装置（又称高压梯度）。相当于气相色谱中的程序升温。第34页，共66页，星期日，2025年，2月5日*内梯度（高压）:利用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。外梯度（低压）:一台高压泵,通过比例调节阀,将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。第35页，共66页，星期日，2025年，2月5日*梯度洗脱装置是通过两个输液泵流速的变化，改变流动相的洗脱能力，其作用与气相色谱的程序升温类似。ABABCC第36页，共66页，星期日，2025年，2月5日*(3)进样装置流路中为高压力工作状态。包括进样口、注射器和进样阀等，其作用是将试样有效地送入色谱柱上进行分离。通常使用耐高压的六通阀进样装置和自动进样器，其结构如图所示：第37页，共66页，星期日，2025年，2月5日*六通阀使用和维护注意事项：①样品溶液进样前必须用0.45μm滤膜过滤，以减少微粒对进样阀的磨损。②转动阀芯时不能太慢，更不能停留在中间位置，否则流动相受阻，使泵内压力剧增，甚至超过泵的最大压力；再转到进样位时，过高的压力将使柱头损坏。③为防止缓冲盐和样品残留在进样阀中，每次分析结束后应冲洗进样阀。第38页，共66页，星期日，2025年，2月5日*(4)高效分离柱色谱柱是实现分离的核心部件，要求柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用条件有关。1.构造：色谱柱由柱管、压帽、卡套（密封环）、筛板（滤片）、接头、螺丝等组成。柱体为直型不锈钢管，内径1~6mm，柱长5～40cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。2.分类：色谱柱按用途可分为分析型和制备型两类①常规分析柱（常量柱），内径常用4.6mm，柱长15或25cm；②毛细管柱（又称微柱，内径0.2~0.5mm；③实验室制备柱，内径20~40mm，柱长10~30cm第39页，共66页，星期日，2025年，2月5日*柱的使用和维护注意事项1.避免压力和温度的急剧变化及任何机械动2.应逐渐改变溶剂的组成，3.色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲，除去留在柱头的杂质。4.选择适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。太高的pH值会使硅胶溶解，太低的pH值会使键合的烷基脱落5