褐角苔遗传转化体系建立和FfCYP98功能的初步研究.pdf

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摘要VII

ABSTRACTIX

1前言1

1.1苔藓植物概述1

1.1.1苔藓植物研究背景1

1.1.2角苔植物研究背景1

1.2植物苯丙烷途径研究概述2

1.2.1苯丙烷途径在维管植物中研究进展3

1.2.2苯丙烷途径在苔藓植物中研究进展3

1.2.3木质素的生物合成4

1.3植物CYP98研究概述7

1.3.1CYP98在维管植物中研究进展7

1.3.2CYP98在苔藓植物中研究进展8

1.3.3CYP98生物学功能8

1.4研究目的及意义10

2材料与方法11

2.1实验材料11

2.1.1植物材料与菌株11

2.1.2主要试剂12

2.1.3实验仪器13

2.1.4主要培养基13

III

贵州师范大学硕士学位论文

2.2实验方法14

2.2.1DNARNA14

褐角苔、提取

2.2.2褐角苔FfCYP98基因克隆15

2.2.3褐角苔FfCYP98基因生物信息学及进化分析19

2.2.4载体构建20

2.2.5烟草注射22

2.2.6农杆菌介导褐角苔的遗传转化23

2.2.7拟南芥的遗传转化26

2.2.8灰霉菌胁迫下植株表型及指标测定27

3结果与分析28

3.1FfCYP98序列的获取和生信分析28

3.1.1设计简并序列克隆褐角苔FfCYP98序列28

3.1.2FfCYP98序列生信分析29

3.1.3FfCYP98亚细胞定位31

3.2褐角苔遗传转化体系建立32

3.2.1褐角苔对潮霉素的敏感性实验32

3.2.2构建褐角苔pCAMBIA1305.2-FfCYP98超表达载体34

3.2.3褐角苔遗传转化体系条件筛选35

3.2.4影响褐角苔转化效率因素36

3.3获得FfCYP98过表达褐角苔和拟南芥植株38

3.3.1FfCYP98过表达褐角苔植株鉴定38

3.3.2异源表达FfCYP98拟南芥植株鉴定40

IV

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3.4FfCYP98基因功能验证41

3.4.1FfCYP98基因影响拟南芥生长发育41

3.4.2FfCYP98影响总酚和总黄酮的生物合成42

3.4.3FfCYP98影响苯丙烷途径关键基因的生物合成43

3.4.4FfCYP98参与抗逆境反应44

FfCYP98参与灰霉菌胁迫44

FfCYP98增强褐角苔盐胁迫能力49

FfCYP98增强褐角苔抵抗低温胁迫50

FfCYP98增强褐角苔适应干旱胁迫51

4结论与讨论53

4.1褐角苔遗传转化体系53

4.1.1抗生素浓度的选择53