植物细胞工程实验室及基本操作.ppt

试验首先要明确目的。例如，蔬菜、作物等的脱毒快繁，是为了脱去病毒，提高产量和质量，就应选择当地栽培确认的高产优质的品种作为脱毒的材料，并且品种一定要可靠。花卉、观赏植物的快繁，也应选择有价值的植物。1、选择优良的基因型从生长旺盛、健壮、无病虫害的植株上取材。母柱代谢旺盛期切取的外植体再生能力强，试验容易成功。2、取材（一）、外植体的选择因外植体不同而不同。如利用茎尖培养，，茎尖大小对脱毒效果非常明显。再如幼胚培养，胚龄也非常重要。（以后具体讲）3、外植体大小选择外植体的生长动态往往与该物种的生长规律（生物钟）有关。因此，最好在植物生长的最适宜时期取材培养。会得到较好的结果。4、选择外植体的时期取材母株的预处理

人工管理，促进母株生长旺盛、代谢活跃，从其上取材培养，容易成功。外植体休眠的处理

有些植物的种子、幼胚、或芽，存在休眠。为了打破休眠，可利用低温处理，或赤霉素等化学物质处理。因植物不同处理温度和时间有所不同。外植体的处理010302取生长期旺盛的生长点部位作为起始培养的外植体。取被内生菌污染的培养物的茎尖不停的转接。加入抗生素，注意抗生素的用量，高浓度容易造成培养物的死亡组织内生菌的处理3.培养基的成分及其配制培养基的成分及其作用无机营养物质培养的植物组织、器官、细胞或者原生质体需要连续的供给某些无机化学物质，除了C、H、O之外，需要量比较多的元素叫大量元素，需要量比较少的元素叫微量营养元素。培养基的大量元素使用量一般在每升几十至几千毫克。大量元素包括N,P,K,Ca,Mg,S。

培养基中加入量最多的是N，N一般以硝酸盐或氨盐，或者两者结合的盐提供大量元素微量元素的用量一般每升不高于几十毫克。植物所需的微量元素有Fe、Cu、Zn、B、Mo、Mn、Co，Cl

其他一些化学药品常带有微量元素杂质，因此要注意微量元素的用量不能过多，多会引起生长抑制等毒害现象。01微量元素0201040203有机物质包括维生素类物质、氨基酸类物质、糖类物质和一些其它的有机添加物维生素类物质维生素类物质在酶系统中有催化功能。硫胺素（VB1）与愈伤组织的产生和生活力有关，可能是所有植物组织培养初期需要的维生素，而盐酸吡哆醇（VB6）促进根的生长，烟酸（VB3，又称维生素PP）促进胚的发育。有的配方中还使用了泛酸钙（VB5）、生物素（VH）、钴胺素（VB12）、叶酸（VBc），Vc等。（二）.有机化合物AA类物质

绝大多数AA适量时对培养效果都有正象效应。常用的有Gly、Asn、Gln。在植物组织培养中，有时也用水解乳蛋白和水解酪蛋白。糖类糖在培养基的作用：

为细胞提供合成新物质的碳骨架

为细胞的呼吸代谢提供底物和能量

维持渗透压

蔗糖是广泛应用的一种碳源。葡萄糖和麦芽糖也是常用的碳源。其它有机物质肌醇（环己六醇）

肌醇可以形成果胶物质，是细胞壁的构建物质另外还可以形成植酸，与阳离子结合或形成磷脂，参与细胞膜的组成。利于胚和芽的形成天然有机物

一些天然的有机物如椰乳、番茄提取物、酵母提取物、马铃薯煮汁也常用于植物组织培养，并表现出了良好的促进作用。01植物激素是在植物体内合成的，对植物生长发育有显著调节作用的微量有机物，而植物生长调节剂是外源的调节植物生长发育的物质。02无机元素和有机营养构成的培养基仅保证培养物的生存与最低生理活动，只有加入植物生长调节物质，才能诱导细胞分裂、脱分化和再分化。（三）、植物生长调节物质生长素类：吲哚类：IAA（吲哚乙酸）、IBA（吲哚丁酸）、IPA（吲哚丙酸）萘酸类：NAA（萘乙酸）苯氧羧酸类：2,4-D（2,4-二氯苯氧乙酸）、2,4,5-T（2,4,5-三氯苯氧乙酸）、2,4,5-TP（2,4,5-三氯苯氧丙酸）等。

其中吲哚乙酸在植物体内普遍存在，是生理活性最强的生长素。1生长素的生理作用2促进细胞生长和细胞分裂5与一定量的细胞分裂素配合共同诱导不定芽的分化、侧芽的萌发与生长、胚状体的诱导。4形成愈伤组织，促进生根3诱导受伤组织表面细胞恢复分裂能力ABCNAA0mg/L，芽（少），根（无）

NAA0.1mg/L，芽（少），根（无），愈伤组织（少量）

NAA5.0mg/L，芽（少），根（多），愈伤组织（一定量是一类腺嘌呤衍生物。主要有激动素（6-糠基氨基嘌呤KT）、6-苄基氨基嘌呤（6-BA）和玉米素（ZT）等。其中最常用的是6—苄基氨基嘌呤。功能：促进细胞的分裂和分化诱导芽的分化促进