食品理化检验维生素的测定 (2).ppt

四、液相色谱分析色谱参考条件：预柱：ODS10μm（4mmx4.5cm)分析柱：ODS5μm（4.6mmx25cm)流动相：甲醇：水＝98：2，混匀，临用前脱气；紫外检测器波长：300nm，量程0.02；进样量：20μL;流速：1.65～1.70mL/min第18页，共56页，星期日，2025年，2月5日测定（1）配制标准溶液VA标准溶液：将VA标准品用无水乙醇溶解配制成浓度为1mg/ml;VE标准溶液:用无水乙醇分别溶解α-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚3种标准品，配制成浓度为1mg/ml的标准液；内标溶液：将苯并『e]芘用无水乙醇配制成浓度为10μg/ml;（2）绘制标准曲线将一定量的VA标准溶液、3种VE标准溶液和内标溶液混和均匀，对其混和液进行色谱分析，以维生素峰面积和内标物峰面积之比为纵坐标，以维生素浓度为横坐标，绘制标准曲线（直线回归方程）。第19页，共56页，星期日，2025年，2月5日（3）样品测定取试样浓缩液20μl注入色谱仪中，进行检测；定性：用标准物色谱峰的保留时间定性；定量：根据色谱图求出某种维生素峰面积与内标物峰面积的比值，以此比值由回归方程求出维生素含量；五、结果计算X：某种维生素的含量，mg/100gρ：由标准曲线上查到的某种维生素含量，μg/mLV：样品浓缩后定容体积,mLm：样品质量，g第20页，共56页，星期日，2025年，2月5日水溶性维生素的理化性质维生素B1的测定维生素B2的测定维生素C的测定三、水溶性维生素的测定第21页，共56页，星期日，2025年，2月5日易溶于水，不溶于大部分有机溶剂；在酸性介质中稳定，在碱性条件下不稳定；易受空气、光、热、酶、金属离子的影响。（一）水溶性维生素的主要理化性质第22页，共56页，星期日，2025年，2月5日（二）维生素B1的测定VB1又叫硫胺素、抗神经炎素1、食品中VB1的存在形式⑴常以游离态存在；⑵复合脂形式存在（磷蛋白）；⑶辅羧酶形式存在VB1在酵母、米糠、麦胚、花生、黄豆以及绿色的蔬菜和牛乳、蛋黄中比较丰富，动物组织不如植物含量丰富。第23页，共56页，星期日，2025年，2月5日⑴VB1在中性、碱性下不稳定，易分解；⑵VB1在酸性条件下稳定，即使加热酸性也稳定；⑶VB1为白色结晶，微溶于C2H5OH，不溶于乙醚或CHCl3，易溶于水。2.VB1的性质第24页，共56页，星期日，2025年，2月5日3.维生素B1的测定方法紫外分光光度法:适用于VB1含量高的样品,灵敏度和准确度较差;高效液相色谱法适用于食品中微量VB1的测定荧光法世界各国都用荧光法测定;荧光法是我国国家标准分析方法（GB/T5009.84-2003）第25页，共56页，星期日，2025年，2月5日⑴原理：硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中，被氧化成一种兰色荧光物质，即为硫色素，在紫外光下，硫色素发出荧光，在一定条件下，其荧光强度与硫色素浓度成正比，即与硫胺素含量成正比。第26页，共56页，星期日，2025年，2月5日（2）定量方法标准曲线法：配制一系列标准浓度试样测定荧光强度，绘制标准曲线，再在相同条件下测量未知试样的荧光强度，在标准曲线上求出浓度。第27页，共56页，星期日，2025年，2月5日(3).操作步骤①试样处理样品匀浆（或粉碎）于低温冰箱中冷冻保存。②提取1)水解2)酶解称样三角瓶高压水解盐酸溶液调pH值乙酸钠溶液酶解淀粉酶定容第28页，共56页，星期日，2025年，2月5日吸附剂采用的是人造浮石。将提取液加入人造浮石交换柱中，VB1被吸附上去，吸附上去后，再用热水淋洗，洗去杂质，最后用热的酸性氯化钾（25%KCl-HAC）把VB1洗脱下来，这样就得到纯VB1。样品热水酸性氯化钾收集酸性氯化钾定容③净化第29页，共56页，星期日，2025年，2月5日④氧化静置→过滤→脱水反应瓶编号标准A瓶标准B瓶样品A瓶样品B瓶加标准液或样品液标准液5ml标准液5ml样品液5ml样品液5ml加氢氧化钠3ml——3ml——加碱性铁氰化钾——3ml——3ml加正丁醇10ml10ml10ml10ml第30页，共56页，星期日，2025年