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眉/睫毛的毛发滋养功效测试方法

1范围

本方法规定了通过测定真人眉/睫毛毛发脂质中十八甲基二十碳烯酸（简称18-MEA）和神经酰胺的含量（第一法），以及通过真人发束（第二法）来评估眉/睫毛产品滋养功效的测试方法，包括但不限于眉笔、眉粉笔、眉胶、睫毛膏、睫毛打底产品等。

作用于人体眉睫毛外其它部位毛发的产品滋养功效可参考引用。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

国家药监局关于发布《化妆品功效宣称评价规范》的公告（2021年第50号）

国家药监局关于发布《化妆品分类规则和分类目录》的公告（2021年第49号）

T/GDCA025-2023发用产品头发滋养功效测评方法

T/GDCA017-2022发用产品护发功效测评方法

T/CAFFCI68-2023化妆品滋养功效测试方法

3基本原则

3.1被测化妆品应为理化和卫生检验合格的产品，人体试验之前应先按照《化妆品卫生规范》完成必要的安全性评价并出具书面证明，安全性评价不合格的样品不再进行人体检验。

3.2人体试验应符合国际赫尔辛基宣言的基本原则，要求受试者签署知情同意书并采取必要的医学防护措施，最大程度地保护受试者的利益。

4术语和定义

4.1滋养nourishing

有助于为施用部位提供滋养作用。

注：定义来源为国家药监局关于发布《化妆品分类规则和分类目录》的公告（2021年第49号）。

4.2毛发滋养hairnourishing

有助于为毛发提供滋养作用，促进毛发光泽度、顺滑度、韧性等提升。

第一法眉/睫毛毛发成分分析法

5原理

毛发中十八甲基二十碳烯酸（简称18-MEA）和神经酰胺的含量对毛发的物理性能起着主要的作用，影响着毛发的光泽度、色泽、光滑度和柔软度等各方面的特性，因此，可通过检测产品使用前后眉/睫毛毛发中18-MEA、神经酰胺含量的变化来评价眉/睫毛产品滋养功效。

6试验条件和志愿者要求

6.1试验环境条件

测试环境温度：20℃～25℃，并对温度实施必要的监测。

6.2志愿者要求

6.2.1受试者人数

按人选和排除标准选择合格的受试者入组，并应根据实际情况考虑可能脱落的人数比例，确保最终完成有效人数不少于30人。

6.2.2受试者纳入标准

1）年龄介于18-60岁，身体健康人群；

2）眉/睫部左右两侧毛发外观无明显差异者；

3）能理解测试过程，自愿参加试验并签署知情同意书者；

4）能够按照要求使用产品者。

6.2.3受试者排除标准

1）怀孕或哺乳期妇女，或近期有备孕计划者；

2）严重系统疾病、免疫缺陷或自身免疫性疾病者；

3）受试部位近3个月没有接受过皮肤治疗、纹眉等医美及其他可能影响结果的测试；

4）有银屑病、湿疹、异位性皮炎等现患皮肤病者；

5）近1个月内口服或外用过皮质类固醇激素等抗炎药物者；

6）受试部位正参加其他临床试验者。

6.2.4受试者限制

1）在试验期间受试部位应使用实验室提供的试验产品，该试验产品替换原自用的同类型产品，且受试部位不可使用其他具有同类功效的产品，试验期间应保持日常生活、作息、饮食等习惯不变；

2）测试当天早上，受试部位不使用产品。

7试剂和材料

7.1真人毛发（眉毛或睫毛）

7.2二氯乙烷（分析纯AR）

7.3乙醇（分析纯AR）

7.4十二烷基硫酸钠（分析纯AR）

7.5烧杯

7.6橡胶手套

7.7镊子

7.8剪刀

7.9修眉刀

8仪器

8.1高效液相色谱仪：可测定毛发中神经酰胺含量的设备

8.2飞行时间二次离子质谱仪：可测定毛发中18-MEA含量的设备

8.3索氏提取器

8.4恒温水浴锅

8.5电子分析天平（精确十万分之一）

8.6恒温恒湿空调或恒温恒湿箱

8.7布氏漏斗

8.8旋转蒸发仪

9测试步骤

9.1神经酰胺含量测定

9.1.1由工作人员用酒精棉片或水润湿的一次性擦脸巾擦拭受试部位，随后采用镊子和修眉刀/剪刀，获取并称量单个受试者眉/睫毛发0.1~0.5g样本。

9.1.2将毛发样本浸泡在0.5%的十二烷基硫酸钠溶液中，将其一同置于已恒温至（40.0±1.0）℃的水浴锅中水浴30min，用布氏漏斗过滤并用清水冲洗至少3次。

9.1.3将毛发置于索氏提取器中，用体积比为2:1的二氯乙烷和乙醇在70℃下萃取2h，随后在相同条件下进行第二次萃取，将得到的萃取液合并后进行过滤操作，真空旋干后得到毛发粗提物。

9.1.4用高效液相色谱仪测定毛发粗提物中神经酰胺的含量。采用C18色谱柱，流动相为甲醇和异丙醇的混合溶液（体积比为55：45），紫外检测波长为205nm，柱温为3