生物样品内中药制剂化学成分分析.ppt

第四节生物样品内药物分析方法三、方法的评价（一）专属性（二）标准曲线与定量范围（三）准确度（四）精密度（五）定量限与检测限（六）样品稳定性第63页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备（五）脏器组织用于研究成分在各器官、组织的分布、积蓄或代谢研究脏器组织可与成分形成强烈结合分离分析前，需预先制成1：5或1：10匀浆，提高溶剂抽提率，降低组织空白值，避免乳化第31页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备三、样本的代表性1、取样条件标准化（摄取标准膳食、控制饮水量等）2、取样时间及其间隔一般在吸收相至少需要2~3个采样点，对于吸收快的血管外给药的药物，应尽量避免第一个点是峰浓度（Cmax）；在Cmax附近至少需要3个采样点；消除相需要4~6个采样点。整个采样时间至少应持续到3~5个半衰期，或持续到血药浓度为Cmax的1/10~1/20第32页，共89页，星期日，2025年，2月5日冷藏或冷冻1、血浆和血清：采血后及时分离（2h），短期4℃，长期-20℃2、尿样：应立即测定，否则需加防腐剂置冰箱保存3、唾液：在4℃下保存，往往需要在取样时测定pH值4、生物样品总的原则：临时解冻，解冻的样品一次测完，不能反复冷冻→解冻→冷冻(FTC)；样品应以小体积分装存放。第三节生物样品的制备第33页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备五、样品的预处理（掌握）目的1.药物从缀合物中释放，测定总浓度2.纯化、富集药物3.适应和满足测定方法要求的灵敏度4.防止对分析仪器的污染和劣化第34页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备五、样品的预处理（掌握）（一）提取方法的选择依据（二）药物的提取（三）药物的分离与净化（四）待测组分的富集（五）衍生物处理第35页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备（一）提取方法的选择依据药物的理化性质药物的浓度范围药物测定的目的生物样品的类型样品处理与分析技术的关系第36页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备（二）药物的提取1、蛋白质处理：干扰分析、污染测定条件2、缀合物水解：测定母体药物3、水溶性强的药物：冷冻干燥，冻干后进行液－固萃取第37页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备1、蛋白质处理加入与水相混溶的有机溶剂有机溶剂使蛋白质的分子内及分子间的氢键发生变化沉淀剂：乙腈（2倍）、甲醇（3倍）乙醇、丙酮：很难挥干浓集超速离心（10000r/min）去除90％蛋白加保护柱第38页，共89页，星期日，2025年，2月5日第39页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备1、蛋白质处理加入中性盐蛋白质脱水沉淀沉淀剂：硫酸铵、硫酸钠、镁盐、枸橼酸盐1：290％去除超速离心（10000r/min）第40页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备1、蛋白质处理加入强酸常用溶剂（与蛋白质阳离子形成不溶性盐沉淀）：10％三氯醋酸、6％高氯酸、硫酸－钨酸混合液体积比：1：0.690％去除方法：超速离心（10000r/min）第41页，共89页，星期日，2025年，2月5日第42页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备1、蛋白质处理沸水浴超滤、透析法（游离药物浓度）第43页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备2、缀合物水解含义：中药制剂待测成分或其代谢物与体内的内源性物质结合生成的产物特点：缀合物极性较母体药物大，亲水性强，不易被有机溶剂提取，需水解处理第44页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备2、缀合物水解水解方法：酸水解，酶水解（葡萄糖醛酸苷酶，芳基硫酸酯酶），溶解剂趋势：直接测定缀合物的量，了解药物代谢情况第45页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备3、冷冻干燥特点：适合于一次不能完成分析的大批量生物样品、水溶性样品、挥发性样品和对热不稳定的样品方法：干冰－丙酮浴、用液氮、冷冻干燥仪第46页，共89页，星期日，2025年，2月5日第三节生物样品的制备（三）药物的分离和净化1、液－液萃取（liquid-liquidextraction,LLE)2、液