液相色谱分析.ppt

*如何减少固定液的流失？方法一、固定相和流动相之间溶解度越小越好（两者极性差别越大越好）方法二、在柱前加一根很短的前置柱(该柱涂有与分析柱相同但有更高含量的固定液，使流动相进入分析柱之前，预先被固定液饱和)或将固定液健合到载体上。方法三、使固定液在担体上结合更牢固第30页，共59页，星期日，2025年，2月5日*2）化学键合固定相通过化学反应将各种不同的有机基团键合到载体(硅胶)表面所形成的柱填充剂，具有稳定、流失小、适于梯度淋洗等特点。这种固定相分离机理：液液分配？双重分离机制，即液液分配+吸附取决于化学键合的表面覆盖率。高覆盖率：液液分配为主；低覆盖率：吸附为主。化学键合固定相的类型：第31页，共59页，星期日，2025年，2月5日*化学键合固定相类型a.硅氧碳键型：≡Si—O—C≡Si－0H＋ROH→≡Si－OR＋H20b.硅氧硅碳键型：≡Si—O—Si—C稳定，耐水、耐光、耐有机溶剂，应用最广；c.硅碳键型：≡Si—Cd.硅氮键型：≡Si—N第32页，共59页，星期日，2025年，2月5日*4.流动相:在液液色谱中，为防止固定相的流失，流动相液体与固定液应尽量不互溶，或者说二者的极性相差越大越好。因此，根据流动相与固定相极性的差别程度，可将液液色谱分为正相分配色谱（流动相极性小于固定相极性，极性小的先流出，适于极性组分分离）和反相分配色谱（流动相极性大于固定相极性，极性大的先流出，适于非极性组分分离）。反相健合相色谱法固定相:硅胶一C18H37、硅胶一苯基等流动相:甲醇\乙睛一水、水+无机盐buf溶液等正相健合相色谱法固定相:硅胶一OH、硅胶一CN等流动相:正已烷中加入适量极性溶剂,如氯仿\醇等第33页，共59页，星期日，2025年，2月5日*ABC正相色谱低极性流动相反相色谱高极性流动相中等极性流动相中等极性流动相时间时间时间时间正、反相色谱中极性和保留时间的关系?待测物极性：第34页，共59页，星期日，2025年，2月5日*二、液固吸附色谱固定相:固体吸附剂，如硅胶、氧化铝等，粒度5～10μm。流动相可以是各种不同极性的一元或多元溶剂。作用机理：根据物质在固定相上的吸附作用不同来进行分离的。当流动相进入色谱柱后，它以单分子层S形式占据吸附剂上的活性中心点，当试样分子X进入色谱柱后，在迁移过程中，与流动相分子在固定相表面发生竞争吸附反应：这种竞争吸附达平衡时，吸附的分配系数K为：K越大，溶质分子的吸附性强，保留值大。应用：相对分子质量中等的油溶性样品，不同官能团化合物、异构体。第35页，共59页，星期日，2025年，2月5日*三、离子对色谱法（IPC）原理主要是基于待测组分在分析柱上的吸附作用不同而进行分离的。将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子加到流动相或固定相中，使其与溶质离子结合形成离子对化合物，利用它在流动相和固定相之间的分配系数不同而进行分离。固定相疏水性的苯乙烯、二乙烯苯树脂或键合的硅胶流动相水+离子对试剂+有机溶剂离子对试剂所带电荷与待测离子相反的离子第36页，共59页，星期日，2025年，2月5日*可以通过改变对离子的浓度和种类，流动相的类型、浓度及pH值从而改变分离的选择性，解决难分离混合物的分离问题。平衡常数KXY为:根据分配系数的定义，溶质的分配系数D为：例如：固定相为非极性键合相，流动相为水溶液，于流动相中加入与待测离子X+有相反电荷的离子Y-：第37页，共59页，星期日，2025年，2月5日*2离子对试剂的选择（1）分离亲水性离子——选用疏水性离子对试剂分离疏水性离子——选用亲水性离子对试剂（2）相对分子量较小的离子对试剂比分子量的分离效果更好第38页，共59页，星期日，2025年，2月5日*思考题：有一强极性有机酸混合物，若用离子对色谱法分离，请问在流动相中应加入阴离子还是阳离子来形成离子对？离子对色谱法的应用分离大分子量的阴、阳离子，特别是带局部电荷的大分子及疏水