显微镜技术基本原理.ppt

透射电子显微镜是以电子束透过样品经过聚焦与放大后所产生的物像，投射到荧光屏上或照相底片上进行观察。透射电镜的分辨率为0.1～0.2nm，放大倍数为几万～几十万倍。2.ＴＥＭ的工作原理3.ＴＥＭ的结构照明系统1成像系统2放大系统3纪录系统电子枪聚光镜物镜中间镜投影镜43.ＴＥＭ的结构——成像系统物镜是用来形成第一幅高分辨率电子显微图像或电子衍射花样的透镜。透射电子显微镜分辨本领的高低主要取决于物镜。因为物镜的任何缺陷都被成像系统中其它透镜进一步放大。欲获得物镜的高分辨率，必须尽可能降低像差。通常采用强激磁，短焦距的物镜。3.ＴＥＭ的结构——成像系统中间镜是一个弱激磁的长焦距变倍透镜，可在0-20倍范围调节。在电镜操作过程中，主要是利用中间镜的可变倍率来控制电镜的放大倍数。3.ＴＥＭ的结构——成像系统如果把中间镜的物平面和物镜的像平面重合，则在荧光屏上得到一幅放大像，这就是电子显微镜中的成像操作。如果把中间镜的物平面和物镜的后焦面重合，则在荧光屏上得到一幅电子衍射花样，这就是电子显微镜中的电子衍射操作。八、激光扫描共聚焦显微镜激光扫描共聚焦显微镜原理图激光扫描共聚焦显微镜实物图1.激光扫描共聚焦显微镜工作原理激光扫描共聚焦显微镜是在荧光显微镜成像的基础上装有激光扫描装置，以单色激光作为光源，使样品被激发出荧光，利用计算机进行图像处理，从而得到细胞或组织内部微细结构的荧光图像。1.激光扫描共聚焦显微镜工作原理共聚焦显微镜利用激光扫描束经照明孔形成点光源对标本内焦平面上的每一点扫描，由于照明孔与检测孔相对于物镜焦平面是共轭的，焦平面上的点同时聚焦于照明孔和检测孔，焦平面以外的点不会在检测孔处成像，这样就得到了标本清晰的光学切面图，克服了普通光镜图像模糊的缺点。1.激光扫描共聚焦显微镜工作原理在显微镜载物台上加一个微量步进马达，使载物台上下移动，改变焦平面，不同层次的光切面图像经计算机图像三维重组，就能获得样品的立体结构图像。2.激光扫描共聚焦显微镜的基本结构01抑制图像的模糊，获得清晰的图像02具有更高的轴向分辨率，并可获取连续光学切片03增加侧向分辨率04由于点对点扫描去除了杂散光的影响3.共焦显微镜与传统显微镜的区别01.细胞的三维重建02.细胞定量荧光测定03.胞内钙离子、pH值和其它离子的动态分析04.胞间通讯和膜的流动性4.CLSM在医学检验中的应用九、干涉相衬显微镜

（interferencecontrastmicroscope）干涉相衬显微镜利用偏振光，有四个特殊的光学组件：偏振器、棱镜、滑行器和检偏器。偏振器直接装在聚光系统的前面，使光线发生线性偏振。在聚光器中安装了石英Wollaston棱镜，可将一束光分解成偏振方向不同的两束光（x和y），二者成一小夹角。聚光器将两束光调整成与显微镜光轴平行的方向。最初两束光相位一致，在穿过标本相邻的区域后，由于标本的厚度和折射率不同，引起两束光发生光程差。在物镜的后焦面处安装了第二个Wollaston棱镜(滑行器)，把两束光波合并成一束。这时两束光的偏振面（x和y）仍然存在。1最后光束穿过第二个偏振装置(检偏器)，检偏器将两束垂直的光波组合成具有相同偏振面的两束光，使二者发生干涉。2九、干涉相衬显微镜九、干涉相衬显微镜x和y波的光程差决定着透射光的多少，光程差值为0时，没有光穿过检偏器；光程差值等于波长一半时，穿过的光达到最大值。于是在灰色的背景上，标本结构呈现明暗差。九、干涉相衬显微镜为了使影像的反差达到最佳状态，可调节滑行器的纵行微调改变光程差，光程差可改变影像的亮度。调节滑行器可使标本的细微结构呈现出正或负的投影形象，通常是一侧亮，而另一侧暗，这便造成了标本的人为三维立体感，类似大理石上的浮雕。干涉相衬显微镜的光路图近场扫描光学显微镜

（near-fieldscanningopticalmicroscope）01近场扫描光学显微镜的微探头是一个中空的、针状的、顶部小于150nm，内孔直径为50nm的玻璃微管，管壁镀铝膜，最终使光线只能从直径为50nm（可见波长的1/10左右）的内孔射入，微管的尾部接上十分灵敏的光量子探测器测量进入内孔的光量。02近场扫描光学显微镜技术的理论分辨率极限约10nm。由于采用可见光对生物样品损害很少，而且既可以用在空气中（与电子显微镜必须在真空条件下相比要优越），又可以用在水中（与一般的光学显微镜相比也有优越性）。近场扫描光学显微镜技术将对研究活体中的病毒和染色体等生物物质的结构和形态发挥作用。0102十、近场扫描光学显微镜电子显微镜的基本结构电子显微镜的