食品卫生细菌学检验技术.ppt

EMB平板照片及原理第31页，共77页，星期日，2025年，2月5日麦康凯琼脂平板Ageofcultureis24h第32页，共77页，星期日，2025年，2月5日大肠杆菌、大肠菌群选择性显色培养基--COLIID用于在37℃下对食品中大肠菌群和大肠杆菌进行检测、计数及大肠杆菌的鉴定本培养基含有两种显色物质，可以直接识别大肠菌群（coliforms）和鉴定大肠杆菌（Escherichiacoli）,而不需附加任何试剂。

菌落颜色玫瑰红蓝色透明.

β-葡萄糖苷酶+--.

β-半乳糖苷酶++-.

?大肠杆菌其它大肠菌群其它革兰氏阴性菌.

β-半乳糖苷酶（+）大肠菌群存在β-半乳糖苷酶（+）大肠菌群存在?

β-葡萄糖苷酶（+）大肠杆菌存在β-葡萄糖苷酶（-）无大肠菌群存在?第33页，共77页，星期日，2025年，2月5日大肠杆菌平板菌落照片???肠杆菌扫描电镜照片.第34页，共77页，星期日，2025年，2月5日食品卫生细菌的检测技术一、乳糖发酵法（一）原理由于大肠菌群指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，即：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。因此大肠菌群的检测一般都是按照它的定义进行的。（二）设备和材料恒温恒湿培养箱（36℃±1℃）、冰箱（0～4℃）、显微镜、天平、高压灭菌锅。恒温水浴（44.5℃±0.5℃）。均质器或乳钵、酒精灯、试管架、平皿（直径为90mm）、试管、吸管、广口瓶或三角烧瓶（500mL）、玻璃珠（直径约5mm）、载玻片、盖玻片等。第35页，共77页，星期日，2025年，2月5日食品卫生细菌的检测技术（三）培养基和试剂1．乳糖胆盐发酵管成分：蛋白胨20g、胆盐（猪或牛或羊）5g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸馏水1000mL。制法：将蛋白胨、胆盐、乳糖溶于水中，校正pH7.4，加入指示剂溴甲酚紫，分装于试管，并倒放入一个小试管（杜拉姆发酵管），在121℃高压灭菌15min，备用。2．伊红美蓝琼脂平板（EMB）成分：乳糖10g、蛋白胨10g、磷酸氢二钾2g、琼脂17g、2%伊红Y溶液20mL、0.65%美蓝溶液10mL、蒸馏水1000mL。制法：先将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾、蛋白胨，混匀，使之溶解。再以蒸馏水补足至1000mL。校正pH值为7.2～7.4，分装于烧瓶内，121℃、15min高压灭菌备用。临用时加入乳糖并加热融化琼脂。冷至60℃左右以无菌手续加入灭菌的指示剂伊红Y溶液和美蓝溶液，摇匀。倾注平皿，备用。第36页，共77页，星期日，2025年，2月5日食品卫生细菌的检测技术3．乳糖发酵管成分：蛋白胨20g、乳糖10g、0.04%溴甲酚紫水溶液25mL、蒸馏水1000mL。制法：将蛋白胨、乳糖溶于水中，校正pH7.4，加入指示剂溴甲酚紫，分装于试管，并倒放入一个小试管（杜拉姆发酵管），在121℃高压灭菌15min，备用。4．EC肉汤成分：胰蛋白胨20g、胆盐（3号或混合胆盐）1.5g、乳糖5g、磷酸氢二钾4g、磷酸二氢钾1.5g、氯化钠5g、蒸馏水1000mL。制法：将上述成分混合溶解后，分装在有发酵倒管的试管中，在121℃高压灭菌15min，最终pH为6.9±0.2，备用。第37页，共77页，星期日，2025年，2月5日食品卫生细菌的检测技术5．磷酸盐缓冲稀释液成分：磷酸二氢钾34g、1mol/L氢氧化钠溶液175mL、蒸馏水825mL。制法：先将磷酸盐溶解于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液校正pH7.2后，再用蒸馏水稀释至1000mL，制成储存液。取磷酸盐缓冲储存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装每瓶100mL或每管10mL，在121℃高压灭菌15min，备用。

6.生理盐水。第38页，共77页，星期日，2025年，2月5日食品卫生细菌的检测技术7.革兰氏染色液（1）结晶紫染色液成分：结晶紫1g、95%乙醇20mL、1%草酸铵水溶液80mL。制法：将结晶紫溶解于乙醇中，然后与草酸铵溶液混合。（2）革兰氏碘液成分：