毛细管电泳分离技术.ppt

试样区带中的缓冲溶液浓度或电阻率与毛细管其它的差异，而引起区带分散。地方的浓度或电阻率不相等时，因两个区域电场强度电泳扩散毛细管区带电泳(CZE)胶束电动毛细管电泳(MECC)毛细管凝胶电泳(CGE)毛细管等电聚焦(CIEF)毛细管等速电泳(CITP)毛细管离子电泳(CIE)毛细管电色谱原理分离过程二、毛细管电泳的分离模式21毛细管区带电泳(capillaryzoneelectrophoresis,CZE)分离原理：由于各组分间荷质比的差异，混合组分处在背景电解质溶液中，在外加电场作用下便获得分离，即CZE是基于溶质的湍度差异进行分离的。是毛细管电泳中最基本的操作模式，应用最广泛，是其它操作模式的母体。31、毛细管区带电泳(CZE)2、胶束电动毛细管电泳(MECC)胶束电动毛细管电泳（micellareletrokineticcapillarychromatography,MECC）是以胶束为假定固定相的一种电动色谱，是电泳技术和色谱技术的结合。它是在电泳缓冲溶液中加入高于胶束临界浓度（CMC）的表面活性剂，如十二烷基硫酸钠（SDS），其疏水基团聚集形成胶束，基于各组分溶质在水相和胶束之间的分配系数不同，而获得分离。不仅能分离离子化合物，还能分离中性化合物。分离过程：在电场作用下，体相溶液在EOF带动下流向阴极，表面带负电荷的胶束泳动方向与EOF方向相反，一般EOF速度大于胶束泳动速度，因此胶束净迁移向阴极。溶质在流速大的体相水溶液和流速相对较缓慢的假固定相胶束间进行分配。3、毛细管凝胶电泳(CGE)logo毛细管凝胶电泳：它是用多孔性的凝胶或其他筛分剂作介质，因凝胶的网状结构类似于分子筛的作用，流经凝胶的试样，按分子的大小分离。第三章毛细管电泳分离技术第一节概述电泳是基于两种或多种带电粒子或微粒，它们所在的介质受到外加直流电场的作用下，其迁移速率不同而得到分离的一类方法。（electrophoresis）011807年，FerdinandFredericReuss就观察到了荷电物质在电场力作用下会发生运动的现象。021909年，由Michaelis对此现象的描述中提出电泳这个术语(elektron和pbore,分别代表电和搬运者的意思)0320世纪30年代，通过Tiselius的研究，电泳技术才得到有实际意义的发展，Tiseluis也因此获得了1948年度的诺贝尔奖。04到20世纪50年代，电泳已经是一种与纸和薄层的平面色谱技术一样的实验室常用技术。0520世纪70年代在HPLC的推动下，电泳分离技术成为了一种“灰姑娘”式的技术发展历程1981年，Jorgenson等介绍了毛细管区带电泳技术。1984年Terabe等提出的胶束电动毛细管色谱。1987年，Hjerten建立了毛细管等电聚焦。1987年，由Chohen等提出了毛细管凝胶电泳。1991年，Monnig等首次提出了高速毛细管电泳。目前，毛细管电泳已广泛应用于氨基酸、肽、蛋白质和核酸等离子型生物大分子的分离分析，加入表面活性剂还可以扩大到中性粒子，甚至应用到细胞和病毒等的分离。同时，在小分子化合物的分离分析方面也取得了重大进展。123456毛细管电泳法：是指以弹性石英毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，依据样品中各组分的淌度（单位电场强度下的迁移速度）和/或分配行为的差异而实现分离的一种分析方法。在毛细管电泳中带电粒子所受的驱动力：电泳力电渗力毛细管电泳的理论基础第二节毛细管电泳基本原理子、胶团)在电场中定向移动的现象。电泳是驱动电解质运动的第一种动力。电泳(Electrophoresis)是指溶液中带电粒子(离01Ve=μeE=μeV/L注：μe:电泳迁移率(电泳淌度);E:电场强度;V－毛细管柱两端施加的电压；L－毛细管柱的长度。μe=νe/E=Q/f电泳迁移速度Ve:02（一）电泳和电渗注：Q－离子所带的净电荷；f－Stokes阻力系数。η是缓冲溶液的粘度(动力学的)，Rs是离子的有效半径(包括溶剂化层)当毛细管长度一定时，带电离子的迁移速度与溶质离子的电荷、施加的电压、缓冲溶液的粘度及带电离子的大小有关。电渗(Electroosmosis)是驱动电解质运动的第二种作用力，它使毛细管中的溶剂在直流电场作用下发生定向运动。电渗流的产生毛细管内壁表面上的硅醇基在pH3的水溶液中，可电离而产生SiO-负离子，使毛细管内壁带上负电荷，因此，溶液中的一部分正离子就靠静电作用而吸附于毛细管内壁上，形成一个双电层(Electric