生物制品制造新技术.ppt

四、聚合酶链反应（PCR)PCR技术是简便、一快速、特异、敏感的检测手段，适于检测不宜分离培养或含量极微的样品中病原体，或分析不同样品中基因片段的异同。PCR与酶切图谱分析和分子杂交技术联合应用可获得更好的效果。种类：如（RT-PCR)、荧光PCR、巢式PCR、多重PCR、定量PCR等。第30页，共71页，星期日，2025年，2月5日五、基因芯片DNA芯片（DNAchip),DNA微阵列（DNAmicroarray)、寡核苷酸微芯片（oligonucleotidemicrochip)指将许多特定的寡核苷酸片段或基因片段作为探针，有规律地排列固定于支持物上，然后与待测的标记样品中的基因按碱基配对原理进行杂交，再通过激光共聚焦荧光检测系统等对芯片进行扫描，并配以计算机系统对每一探针上的荧光信号作出比较和检测。第31页，共71页，星期日，2025年，2月5日20世纪90年代初，美国Fodor博士提出并研究。用于基因表达谱分析、新基因的发现、基因突变与多态性分析、基因组文库作图、疾病的诊断与预测、药物筛选，以及司法与刑侦、环境与食品卫生监督等。六、其它技术核苷酸序列分析、多位点酶电泳等。第32页，共71页，星期日，2025年，2月5日第三节、抗体工程技术多克隆抗体

(Polyclonalantibody)一.概念给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物,它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的,称为多克隆抗体。第33页，共71页，星期日，2025年，2月5日二.多克隆抗体的应用免疫学检测被动免疫治疗和紧急预防三.存在问题特异性差,用于免疫学检测容易出现交叉反应第34页，共71页，星期日，2025年，2月5日单克隆抗体

(Monoclonalantibody,McAb)一、单抗概念:通过B细胞杂交瘤技术,获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体。二、B细胞杂交瘤的类型小鼠-小鼠大鼠-大鼠小鼠-人人-人1975年Kohler和Milstein建立体外淋巴细胞杂交瘤技术，1984年获得诺贝尔生理学和医学奖。第35页，共71页，星期日，2025年，2月5日三、单抗与多抗区别如图：5.2。第36页，共71页，星期日，2025年，2月5日四、单抗的制备（一）淋巴细胞杂交瘤技术：（lymphocytehybridomatechnology)。将经预定抗原免疫的淋巴细胞与失去次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(HGPRT）或胸腺嘧啶核苷激酶(TK）合成能力的骨髓瘤细胞系细胞融合，产生杂交瘤细胞，经过培养、筛选或克隆化，获得既能分泌针对预定抗原的单抗又有无限制增殖能力的杂交瘤细胞系。第37页，共71页，星期日，2025年，2月5日（二）杂交瘤技术的原理1.亲本细胞的选择小鼠骨髓瘤细胞:次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)缺陷型免疫脾细胞:来自经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾脏（B细胞）第38页，共71页，星期日，2025年，2月5日2.细胞融合骨髓瘤细胞脾细胞融合后细胞的类型:未融合的脾细胞杂交瘤细胞未融合的瘤细胞细胞融合杂交瘤细胞PEG第39页，共71页，星期日，2025年，2月5日3杂交瘤细胞的选择性培养DNA合成的途径：糖+氨基酸氨基喋呤(Aminopterin,A)TK核苷酸DNA胸腺嘧啶核苷TMP(Thymidine,T)核苷酸前体HGPRT次黄嘌呤