植物组织培养第六章植物细胞培养.ppt

培养细胞的同步化0102同步培养：在培养基中大多数细胞都能同时通过细胞周期的各个阶段，同步性的程度以百分百分数表示。三、培养细胞的同步化实现悬浮培养细胞同步化的方法：饥饿法：先对细胞断绝供应一种进行细胞分裂所必需的营养成分或激素，使细胞停滞在G1期或G2期，经过一段时间的饥饿后，当重新在培养基中加入这种限制因子时，静止细胞就会同时进入分裂。三、培养细胞的同步化抑制法：使用DNA合成抑制剂，也可使细胞培养同步化。当细胞受到这些化学药物处理后，由于这些核苷酸类似物的存在阻止了DNA的合成，细胞周期只能进行到G1期，细胞都滞留在G1期和S期的边界，当把这些抑制剂除去后，细胞就进入同步分裂。旋转振荡培养往返振荡培养旋转培养搅动振荡培养为了改善液体培养基中材料的通气状况，需进行培养基的不断振荡：四、培养基的振荡培养基成分：

N6，MS，B5适合单子叶植物细胞，

MS，B5，LS，SL适合双子叶植物细胞。

条件培养基适合单细胞和低密度细胞培养。

需要硝态氮、铵态氮、无机磷浓度更高。影响细胞培养的因素0102细胞密度：培养基的成分和起始细胞密度对单细胞培养成败有影响。起始密度：细胞培养最低的有效密度，即能使细胞分裂、增殖的最低接种量，低于这个密度细胞不能分裂，甚至很快解体死亡。影响细胞培养的因素植物生长调节剂：细胞悬浮培养时，常表现一种自然的聚集现象，加入2，4-D，少量水解酶或酵母提取液，能够增加细胞的分散度。在悬浮培养时，PH变动相当大。加入EDTA使铁和其他金属离子长期处于可利用状态。硝态氮和铵态氮之间进行调整可作为稳定PH的一种方法。二氧化碳对细胞培养没有太大影响，但在低密度细胞培养中，二氧化碳对于诱导细胞分裂可能有重要作用，PH和二氧化碳浓度第三节植物细胞生长和活力的测定悬浮培养中细胞生长的测定细胞计数：把1份培养加入到2份8%三氯化铬溶液中，在70℃下加热2-15分钟，然后将混合物冷却，用力震荡10分钟，用血球计数板进行细胞计数。细胞总体积：将已知体积的均匀分散的悬浮液放入1个15ml刻度离心管中，在2000g下离心5min，得到细胞沉积的体积。细胞密实体积（PCV）：以每ml培养液中细胞总体积的ml数表示。细胞鲜重和干重：一、悬浮培养中细胞生长的测定细胞有丝分裂的指数：在一个细胞群体中，处于有丝分裂的细胞占细胞总数的百分数。细胞植板率=每个平板形成的细胞团数/每个平板接种的细胞总数悬浮培养中细胞生长的测定培养细胞活力的测定TTC法伊凡蓝染色法荧光素二乙酸法（FDA法）第三节植物细胞生长和活力的测定植物次生代谢产物的生产突变体选择诱导多变体第四节植物细胞培养的应用生产天然的植物成分通过细胞培养可得到大量合成的植物次生化合物，如生物碱、抗菌剂、抗血平、橡胶、类固醇、糖类衍生物、天然色素等很多物质.植物次生代谢产物的生产12海巴戟的植物体内——蒽醌胡萝卜愈伤组织——紫红色、橙红色、绿色、黄白色4种愈伤组织株系紫草——紫草色素长春花细胞和愈伤组织培养物——利血平和阿马灵三七的愈伤组织培养物——三七皂苷（含量达干重的10.25%）三分三的愈伤组织中——茛菪碱（含量可达干重的0.55%植物次生代谢产物的生产0102对于能够促成这类天然产物合成的营养条件和其他培养条件缺乏了解03已知：在培养细胞中生物碱的产量受培养物的生长阶段、培养基成分、培养条件（光照、温度）及细胞基因型等的影响。04在很多情况下，有些细胞培养物不能产生天然化合物或者比正常的植株产量低01原因：（1）培养细胞与完整植株不同，培养的细胞缺少完整植株所有的那种进行转化反应的能力02问题：细胞在遗传上的不稳定性1解决：对能够合成这些化合物的细胞进行不断的筛选，选择那些稳产和高产的细胞系。2问题：第六章植物细胞培养掌握单细胞培养概念，了解单细胞制备途径，掌握单细胞培养繁殖的方法。掌握植物细胞悬浮培养的意义和细胞株筛选方法，了解悬浮培养类型及方法，清楚细胞悬浮培养的应用。01具有单细胞分离和培养基本能力，具备细胞悬浮成批培养和连续培养基础知识。01目的与要求细胞培养，即通过细胞继代培养，使细胞无限增殖，并使高等植物的单个细胞，在离体培养条件下，通过诱发细胞分裂形成细胞团，再分化形成具根芽的完整植株。第一节单细胞培养一、单细胞培养意义1、建立单细胞无性系2、对培养的单细胞科诱发突变3、排除体细胞干扰4、遗传转化受体的建立二、