感染性疾病的分子诊断.ppt

原位杂交01PCR02NASBA技术03bDNA技术04荧光定量RT-PCR技术052.HIV核酸的检测的分子生物学方法一、感染性疾病的诊断和治疗监测一、感染性疾病的诊断和治疗监测logo（四）SARS冠状病毒从SARS病人体内分离到的冠状病毒与任何以往确定特征的冠状病毒关系不密切，且该病毒的有限区域的复制酶（rep）基因序列与其它冠状病毒明显不同，因而被称为SARS相关冠状病毒。SARS相关冠状病毒的检测WHO推荐SARS-CoV特异性检测方法：分子生物学检测免疫学检测细胞分离培养一、感染性疾病的诊断和治疗监测01免疫学方法难以在感染的窗口期对病毒感染进行早期检测细胞培养所需时间较长，分离阳性率不高PCR方法可以确诊早期疑似病人，但PCR试验阴性并不能说明没有SARS-CoV感染0203一、感染性疾病的诊断和治疗监测一、感染性疾病的诊断和治疗监测logo（五）人禽流感病毒人禽流行性感冒（简称人禽流感）是由禽甲型流感病毒某些亚型的毒株引起的急性呼吸道传染病，感染者大多因多脏器功能衰竭而死亡。近年来，由H5N1亚型禽流感病毒引起的疫情广泛传播对人类的健康造成全球性的重大威胁。由于病毒的不断变异，开发新型抗流感药物成为各国极为迫切的重大课题。其中，揭示与流感病毒密切相关的蛋白质的三维结构不仅对揭示流感病毒复制机制具有重要科学意义，而且对开发抗流感病毒药物具有重要价值。最近，由中科院生物物理研究所刘迎芳研究员领导的研究组和饶子和院士领导的研究小组在这一领域取得突破性进展，他们在国际上率先揭示了流感病毒聚合酶关键部分PA亚基与PB1多肽复合体的精细三维结构。2020感染性疾病的诊断和治疗监测012021病原学特征及致病性022022人禽流感病毒的检测03（五）人禽流感病毒感染性疾病的分子诊断

感染性疾病的诊断和治疗监测1耐药监测与分子流行病学调查2医院获得性感染的监测与控制3分子生物学检验技术在感染性疾病中的应用主要包括对病原生物进行鉴定、分型、耐药诊断和治疗过程中的疗效监测等01检测核酸分子或蛋白质分子02目前已经应用于一些重要的感染性疾病，如结核病、病毒性肝炎、艾滋病、SARS、人禽流感等03一、感染性疾病的诊断和治疗监测结核分枝杆菌01乙型肝炎病毒02人类免疫缺陷病毒03SARS冠状病毒04人禽流感病毒05一、感染性疾病的诊断和治疗监测结核分枝杆菌(M.tuberculosis)，俗称结核杆菌，是引起结核病的病原菌。可侵犯全身各器官，但以肺结核为最多见。结核病至今仍为重要的传染病。估计世界人口中1/3感染结核分枝杆菌。据WHO报道，每年约有800万新病例发生，至少有300万人死于该病。我国建国前死亡率达200-300人/10万，居各种疾病死亡原因之首，建国后人民生活水平提高，卫生状态改善，特别是开展了群防群治，儿童普遍接种卡介苗，结核病的发病率和死亡率大为降低。但应注意，世界上有些地区因艾滋病、吸毒、免疫抑制剂的应用、酗酒和贫困等原因，发病率又有上升趋势。（一）结核分枝杆菌基因组特点结核分枝杆菌核酸的检测生物学特性与致病性结核分枝杆菌010203一、感染性疾病的诊断和治疗监测结核分枝杆菌生物学特性与致病性结核分枝杆菌复合群包括人结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌，其中前三者对人类致病人型结核分枝杆菌感染的发病率最高一、感染性疾病的诊断和治疗监测结核分枝杆菌生长缓慢，增殖一代需15～20小时，生长成可见菌落一般需4～6周在组织细胞内大量繁殖引起炎症，菌体成分和代谢物质的毒性以及菌体成分诱发的机体免疫损伤0102一、感染性疾病的诊断和治疗监测基因组特点共价封闭环状结构标准株结核分枝杆菌基因组全长4.4kb,包含4000个蛋白质编码基因和50个RNA编码基因一、感染性疾病的诊断和治疗监测重复序列：如IS6110，仅存于结核分枝杆菌复合群细菌染色体上长1355bp的重复插入序列，具有复合群特异性蛋白质编码基因rRNA基因：每个细胞约含有103～104个rRNA，含有结核分枝杆菌高度保守的序列，也有分枝杆菌种特异性序列一、感染性疾病的诊断和治疗监测实验室检查手段主要包括标本直接涂片染色镜检、分离培养鉴定以及血清学抗原检测方法分子生物学理论和技术已经用于分枝杆菌的分子结构和功能的研究中，并开始用于临床菌种和耐药株的鉴定及监测0102结核分枝杆菌核酸的检测一、感染性疾病的诊断和治疗监测2PCR直接测序鉴定法3PCR-DNA探针鉴定法1PCR菌种鉴定法4PC