植物组织或器官中丙二醛含量的测定.ppt

植物组织或器官在衰老或逆境下遭受伤害，往往发生膜脂的过氧化作用。膜脂过氧化的指标有很多，如丙二醛（MDA）的产生、过氧化物的碘量滴定、氧吸收、共轭双键测定等。由于MDA的测定方法简便，所以常用来评价植物脂过氧化强弱的指标。测定组织或器官脂质的过氧化反应所产生的丙二醛含量时，通常利用硫代巴比妥酸（TBA）在酸性下加热与组织中的MDA产生显色反应，反应产物是粉红色的3,5,5-三甲基噁唑2,4-二酮。用分光光度计测定532nm及600nm波长时的光密度值，根据光密度的大小可计算MDA含量。10%三氯乙酸（TCA）；0.6%硫代巴比妥酸，先加少量的氢氧化钠（1mol/L）溶解，再用10％的三氯乙酸定容；石英砂。植物组织或器官中

丙二醛含量的测定制作人：刘新单位：生命科学学院植物生理学教研室一、实验目的掌握植物体内丙二醛含量测定的原理及方法。了解丙二醛积累对细胞的伤害

二、实验原理：硫代巴比妥酸TBA丙二醛3,5,5′-三甲基恶唑2,4-二酮（三甲川）逆境膜脂的过氧化作用丙二醛酸性粉红色三、实验材料：受干旱、高温、低温等逆境胁迫的植物叶片或衰老的植物器官（以正常条件下的作为对照）：实验仪器：紫外可见分光光度计离心机四、实验步骤：MDA的提取称2g叶片，加入5ml磷酸缓冲液（50mmol，pH值为7.8）及少量石英砂，于冰浴中研磨提取，匀浆液以12000g离心力作用下（4度）离心10min，其上清液即为MDA提取液。MDA的测定取1mlMDA提取液，加3ml27％三氯乙酸和1ml2%TBA。混和液在95度水浴中保温30min后，立即置于冰浴中冷却，然后离心10min，于波长532nm和600nm下测定OD值。五、结果计算以测得的OD532减去OD600的非特异吸收值，按155mmol-1cm-1消光系数计算MDA含量。分别计算衰老和对照组的值。MDA浓度(μmol/L)=6.45(D532-D600)-0.56D450MDA含量(μmol/gFW)＝D450、D532、D600分别代表450nm、532nm和600nm波长下的光密度值。植物组织或器官在衰老或逆境下遭受伤害，往往发生膜脂的过氧化作用。膜脂过氧化的指标有很多，如丙二醛（MDA）的产生、过氧化物的碘量滴定、氧吸收、共轭双键测定等。由于MDA的测定方法简便，所以常用来评价植物脂过氧化强弱的指标。测定组织或器官脂质的过氧化反应所产生的丙二醛含量时，通常利用硫代巴比妥酸（TBA）在酸性下加热与组织中的MDA产生显色反应，反应产物是粉红色的3,5,5-三甲基噁唑2,4-二酮。用分光光度计测定532nm及600nm波长时的光密度值，根据光密度的大小可计算MDA含量。10%三氯乙酸（TCA）；0.6%硫代巴比妥酸，先加少量的氢氧化钠（1mol/L）溶解，再用10％的三氯乙酸定容；石英砂。*