动物细胞制药课件.pptVIP

四、其他培養用液平衡鹽溶液消化液pH調整液平衡鹽溶液（balancedsaltsolution，BSS）???組成平衡鹽溶液主要是由無機鹽、葡萄糖組成作用是維持細胞滲透壓平衡，保持pH穩定及提供簡單的營養用途主要用於取材時組織塊的漂洗、細胞的漂洗、配製其他試劑配製溶液應使用雙蒸水或去離子水。如果配方中含有Ca2+、Mg2+，應當首先溶解這些成分。配好的平衡鹽溶液可以過濾除菌或高溫滅菌四、其他培養用液消化液用途取材進行原代培養時需要將組織塊消化解離形成細胞懸液傳代培養時也需要將貼壁細胞從瓶壁上消化下來???胰酶溶液胰酶的活性可以用消化酪蛋白的能力表示，常見1:125和1:250組織培養用的胰酶溶液一般配製成0.1～0.25%的濃度，配製時要用不含Ca2+、Mg2+及血清的平衡鹽溶液胰酶作用及溶解的最佳pH8～9，配製胰酶溶液應將液體調至pH8過濾除菌。四、其他培養用液消化液EDTA溶液EDTA溶液也常用來解離細胞，它的作用機制是破壞細胞間的連接。對於一些貼壁特別牢固的細胞，還可以用EDTA和胰酶的混合液進行消化EDTA溶液的使用濃度為0.02%，配製時應加堿助溶，配製後可過濾除菌，也可高溫消毒滅菌。膠原酶溶液膠原酶在上皮類細胞原代培養時經常使用，膠原酶作用的對象是膠原組織，因此不容易對細胞產生損傷。膠原酶的使用濃度為0.1～0.3mg/L或200000U/L，作用的最佳pH6.5膠原酶不受Ca2+、Mg2+及血清的抑制，配製時可用PBS。四、其他培養用液pH調整液NaHCO3溶液NaHCO3是培養基中必須添加的成分，一般情況下按說明書的要求准確添加，以保證培養基在5%CO2的環境下pH達到設計標準。如果是封閉式培養，即不與5%CO2的環境發生交換達到平衡，所使用的培養基就不能按照說明書所要求加入NaHCO3。此時常用5.6%或7.4%的NaHCO3溶液調節培養基，使之達到所要求的pH環境。HEPES溶液HEPES（羥乙基呱嗪乙硫磺酸）是一種弱酸，對細胞無毒性，主要作用是防止培養基pH迅速變動。在開放式培養條件下，觀察細胞時培養基脫離了5%CO2的環境CO2氣體迅速逸出，pH迅速升高，若加了HEPES，此時可以維持pH7.0左右。一般在進行克隆化培養時要添加HEPES。四、其他培養用液抗生素常用的是青黴素和鏈黴素，俗稱“雙抗溶液”。青黴素主要是對革蘭陽性菌有效，鏈黴素主要對革蘭陰性菌有效。加入這兩種抗生素可預防絕大多數細菌污染。一般使用青黴素終濃度0.007～0.008g/100ml，鏈黴素終濃0.01g/100ml配製成100倍濃縮液，可用PBS或培養基配製。四、其他培養用液五、環境和消毒細胞培養中常用的儀器設備無菌室超淨工作臺三重純水蒸餾器抽氣泵壓力蒸氣消毒器電熱恒溫培養箱CO2培養箱恒溫水浴鍋倒置顯微鏡離心機無菌篩檢程式洗刷裝置細胞計數板和電子細胞技術儀五、環境和消毒細胞培養的無菌環境無菌室無菌室的結構一般由更衣間、緩衝間、操作間三部分組成。無菌室的消毒和防汙染為保持無菌狀態，經常消毒是必要的，通常採用每日（使用前紫外