动物细胞制药课件.pptVIP

動物細胞制藥;第一節概述;細胞工程（Cellengineeringorcytotechnology）

以細胞為單位，應用細胞生物學、分子生物學等理論與技術，按人們的意願有目的地進行設計和操作，改變細胞的某些遺傳特性，達到改良或產生新品種的目的，或使細胞增加/重新獲得產生特定產物的能力，在離體條件下進行大量培養、增殖，提取目的產品。;第一節概述;第二節動物細胞的形態和生理特點;第二節動物細胞的形態和生理特點;第二節動物細胞的形態和生理特點;二、動物細胞的生理特點;G1期：4～6h，合成DNA聚合酶及RNA合成

S期：6～8h，DNA合成

G2期：2～5h，DNA量加倍,RNA合成

M期：0.5～1h，染色體分裂;細胞代數為細胞分裂次數

傳代數表示細胞培養分種傳代次數

細胞代數=傳代數×分種數/2

X=(logN-logN0)÷log2

X：代數

N：培養最終細胞數

N0：培養起始細胞數

倍增時間=培養經過時間÷代數;第二節動物細胞的形態和生理特點;第二節動物細胞的形態和生理特點;第二節動物細胞的形態和生理特點;5、動物細胞對培養基要求高

必需氨基酸、維生素、無機鹽、

微量元素、葡萄糖、細胞生

長因數、貼壁因數等。;6、動物細胞蛋白質的合成途徑和修飾

功能與細菌不同

動物細胞蛋白質的合成部位：

游離核糖體

粗面內質網的核糖體;游離核糖體合成蛋白質用於細胞質基質內。

粗面內質網的核糖體合成蛋白質是分泌的和膜中的整合蛋白，多為糖蛋白。;動物細胞生產藥物;第三節生產用動物細胞的要求與獲得;二、生產用動物細胞的獲得;2、二倍體細胞系;二倍體細胞有正常細胞的特點;3、轉化細胞系;4、融合細胞系;第三節生產用動物細胞的要求與獲得;2、MRC-5

從正常男性肺組織中獲得的人二倍體細胞系。核型2n=46，屬成纖維細胞，42-46代，較WI-38增殖快，對環境敏感性較WI-38低，對病毒敏感，用於製備疫苗。;3、CHO-K1;4、BHK-21

從5只無性別的生長1天的地鼠幼鼠腎臟中分離的;成纖維樣細胞,核型為2n=44;培養基為DMEM+7%胎牛血清。用於增殖病毒，包括多瘤病毒、口蹄疫病毒、狂犬病毒等並製作疫苗，現已用於工程細胞構建。;5、Vero：

從正常成年非洲綠猴腎臟分離的。為貼壁依賴的成纖維細胞，核型2n=60；

199+5%胎牛血清，增殖病毒（包括多瘤病毒、脊髓灰質炎、狂犬病毒）;6、Namalwa;7、SP2/0-Ag14;8、Sf-9

1983年從親代IPLB—SF21AE中克隆形成。親代細胞從秋粘蟲的蛹卵組織中分離獲得。它對苜宿尺蠖核型多角體病毒和其他杆狀病毒高度敏感。

通常用的培養基為Grace培養基，添加3.3g/L水解乳蛋白和3.3g/L酵母浸液,10%胎牛血清。用於高效表達外來蛋白製品。;9、C127;10、COS細胞;11、MDCK;四、基因工程細胞構建和篩選;1、真核細胞基因表達載體的構建;牛痘病毒：用構建多價疫苗

腺病毒、逆轉錄病毒：用於基因治療。

杆狀病毒：用於外源基因表達。;杆狀病毒作為載體的優點：;④多角體蛋白基因有非常強的啟動子，產生的蛋白質可占全部蛋白質的20%～30%；

⑤用光學顯微鏡可看到多角體，可以此作為標記物，選陽性克隆。

⑥如用家蠶杆狀病毒，還可在蠶體表達外源基因。;質粒載體;2、基因載體的導入和高效表達

工程細胞株的篩選;基因載體導動物細胞常用方法是：

磷酸鈣沉澱法

電穿孔法;磷酸鈣沉澱法：;電穿孔法：;五、細胞庫的建立;原始細胞;生產用細胞庫;第四節動物細胞的培養條件與培養基;一、動物細胞的培養條件

1、器材的清洗和消毒

浸泡、刷洗、泡酸、沖洗

組分強酸次強酸弱酸

重鉻酸鉀/g63120100

硫酸/ml1000200100

水/ml20010001000;器材的消毒滅菌：物理、化學、抗生素

2、水質

3、pH：7.2-7.4,緩衝系統

4、滲透壓:290-300mOsm/kg，

1mg/mlNaCl→32mOsm/kg，

平衡鹽溶液（BBS）

5、溫度：37±0.50C

6、空氣：＜30%;二、動物細胞的培養基的種類和組成;⒈天然培養基

血清、羊