溶血性贫血实验室检查.pptVIP

3、变性珠蛋白小体生成试验又称“红细胞包涵体”、“赫恩小体”、“Heinz小体”、“海因小体”原理：G-6PD缺乏致红细胞内GSH减少，高铁血红蛋白增高，形成变性珠蛋白小体，沉着于红细胞膜上。抗凝血+乙酰苯肼37℃温育2～4h充分的氧化 其Hb氧化成Heinz小体（用结晶紫、甲紫或煌焦油兰染色，油镜观察）结果：该小体为圆形或多角形色涵体，φ0.2～2um。多位于红细胞边缘，一个红细胞含1～20个，多为1～2个，以含5个以上小体的红细胞计数1.正常人＜30%2.G6PD缺陷症、不稳定Hb、HbH病等常高于45%4、G6PD荧光斑点试验和活性测定原理:G6PD使NADP还原成NADPH,后者在紫外线照射下发出荧光参考值：正常人强荧光；酶活性5U/gHb6-磷酸葡萄糖NADPGSHH202氧合血红蛋白6-磷酸葡萄糖酸NADPHGSSGH20高铁血红蛋白G-6PDADP+PK磷酸丙酮酸丙酮酸NAPH乳酸NAD（无荧光）5、丙酮酸激酶荧光筛选试验和活性测定原理:参考值01正常PK活性荧光在20min内消失02酶活性15.1±4.99U/gHb03临床意义04PK严重缺乏（纯合子）荧光60min不消失05杂合子荧光25~60min消失06(三)、珠蛋白合成异常的检测原卟啉血红素Hb（四聚体）铁血红蛋白的结构珠蛋白：由4条多肽链组成2条α链正常人HbA（?2?2）97%HbA2（?2?2）1.5-3%HbF（?2?2）0.5-0.8%2条非α链血红蛋白病珠蛋白肽链量的不正常(地中海贫血)血红蛋白分子结构异常(异常血红蛋白病)遗传性溶血性疾病1.血红蛋白电泳蛋白质的两性性质—是由氨基酸的NH+与COO-决定的。等电点—调节水溶液的pH，能使蛋白质的NH+与COO-数目相等呈电中性，此时蛋白质无电泳，在水中电解度小，并发生沉淀。电泳：一个带电荷的离子或胶体颗粒在电场中可向一极移动。原理：在一定的pH缓冲液中，缓冲液的pH大于Hb等电点，其带负电，在电场中向阳极移动；反之向阴极移动。由于各种Hb珠蛋白肽链结构不同，其等电点不同，电泳方向和速度亦不同，故可分离出不同的区带，对区带进行电泳扫描，可进行Hb定量分析。电泳结果(+)HJKAGDE(-)1.HbH增多是HbH病，为α-地中海贫血的一种；HbA2明显增高见于轻型β地中海贫血；HbF明显增高见于中重型β地中海贫血。2.正常值：醋纤法（PH8.6）HbA96%~98%，HbA21.0%~3.1%，HbF＜2%CAA2FA异常正常胎儿蛋白HbF（?2?2）酸洗脱试验：含HbF红细胞着色原理：HbF抗酸力强临床意义：脐带血、新生儿、婴儿阳性成人小于1%地中海贫血轻者少数红细胞阳性地中海贫血重症阳性细胞增多HbF定量测定（碱变性试验）:原理：碱性溶液中HbF不易变性沉淀，可测定滤液中Hb量临床意义：2岁-成人HbF2%，4%为异常重型?地贫80-90%AL、AA、淋巴瘤等可轻度升高0102HbA2定量测定诊断轻型?地贫的重要依据限制性内切酶谱分析基因诊断根据病因和发病机制的贫血分类一、红细胞生成不足（一）造血干细胞复制和分化异常再生障碍性贫血异常细胞或组织骨髓浸润骨髓病性贫血原因不明或多种机制慢性系统性疾病（慢性感染、炎症、恶性肿瘤、慢性肾病、肝病、风湿性疾病、内分泌病等）伴发的贫血（二）细胞分化和成熟障碍DNA合成障碍