氧化应激与消化道功能的关系.pptVIP

正常大鼠肠结构马可，2006静脉注射LPS后肠道病理变化对照组诱导组修复组对照组、LPS诱导组和复合抗氧化剂修复组空肠光镜照片(×4)赵珂立，待发表胃溃疡慢性胃炎消化性溃疡胃癌结肠疾病自由基与胃肠道疾病氧自由基学说认为：幽门螺旋杆菌(Hp)致慢性胃炎的主要因素之一，而其诱发机制可能同氧自由基有关。与自由基有关，其中主要与NO及O2-有关，氧自由基能直接作用于细胞的大分子，同时可作为细胞内信息转导信号引起细胞浆内核转录因子(如NF-kB)激活，引起核内有关的基因转录增加。是很多急性、慢性炎症及免疫失调等疾病发生发展的分子生物学基础。人和动物研究中发现，病变肠黏膜中ROS产生明显增多，ROS同疾病活动性相关。在临床试验中发现给予自由基清除剂可以预防难治性溃疡复发，促进其愈合。流行病学调查揭示，抗氧化剂如维生素C和维生素E的缺乏与胃癌发生有关。补充维生素C可减少胃粘膜中的DNA损害。氧化损伤的检测方法直接检测法电子自旋共振法又称电子自旋共振(electronspinresonance,ESR),是反应活性高、寿命短的自由基最直接最有效的测定方法。☆优点：灵敏度高,能检测到绝大多数的自由基。☆缺点：自旋波谱仪价格昂贵,操作复杂,在普通实验室中难以推广。电子自旋共振波谱仪常用鲁米诺(luminol,5-胺基-邻苯二甲酰环肼)、光泽精等作为发光增效剂。其原理为,鲁米诺被ROS自由基氧化成激发态的氨基肽盐离子,当其返回基态时放出大量光子,从而对化学发光起放大作用。01操作简单,价格低廉,目前被广泛用于ROS的检测和研究。02化学发光法间接测定法脂质过氧化损伤的测定测定丙二醛的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度,间接反映出细胞损伤的程度。常用硫代巴比妥酸法来测定丙二醛含量,此法是应用最多也是最古老的方法。DNA被氧化时,鸟苷酸的C-8是最易发生损伤的位点。因而,由此形成的8-羟基脱氧鸟苷是评价DNA氧化损伤最常使用的生物标志物。8-羟基脱氧鸟苷的特异性单克隆抗体，彗星实验又称单细胞凝胶电泳。DNA氧化损伤的检测1蛋白质氧化损伤的检测其传统的检测技术是使用二硝基苯肼的比色法,使用分光光度法或者酶联免疫吸附法测定2,4-二硝基苯肼与蛋白质羰基反应生成的腙,来衡量蛋白质的损伤情况。2抗氧化酶类的检测超氧化物歧化酶的检测SODSOD能通过歧化作用清除氧自由基，测定SOD的活力可间接反应组织细胞抗氧化损伤、机体清除自由基的能力。直接法和间接法,包括电泳法、免疫法、ESR法、化学发光法、脉冲辐解法、紫外分光光度计法等。1是一种抗氧化酶,在氧化应激条件下,其在细胞的浓度明显减少。可采用紫外分光光度计法、分光光度法或者酶联免疫吸附法等进行测定。谷胱甘肽过氧化物酶的测定过氧化氢酶是一种酶类清除剂，其机制实质上是过氧化氢的歧化,必须有两个过氢化氢先后与过氧化氢酶相遇且碰撞在活性中心上,才能发生反应。过氧化氢浓度越高,分解速度越快。一般也采用紫外分光光度法对其进行检测。过氧化氢酶的测定2氧化应激导致细胞凋亡的检测方法氧化应激导致细胞凋亡的形态学检测主要通过光镜伊红染色或吉姆萨染色和电镜对凋亡的细胞进行形态观察,可观察到染色质浓缩,核膜起皱破裂,凋亡小体形成等,以判别细胞凋亡。磷脂酰丝氨酸外翻分析ROS致细胞凋亡的早期改变之一是细胞膜磷脂酰丝氨酸从细胞膜内转向细胞膜外。膜粘连蛋白5对转向到细胞膜外的细胞膜磷脂酰丝氨酸有高度的亲和性。用异硫氰酸荧光素标记膜粘连蛋白5,结合使用碘化丙啶对凋亡细胞进行双染色,即可区别凋亡细胞与坏死细胞。DNA片断化检测氧化应激致细胞凋亡时，其染色质发生浓缩,染色质DNA断裂,形成50～300kb长的DNA大片段,或者180～200bp整数倍的寡核苷酸片段,健康活细胞DNA电泳为一条区带,而凋亡细胞DNA电泳出现特征性的阶梯状条带。有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳两种。应激24h细胞DNA琼脂糖电泳图陈群，2007氧化应激与消化道功能的关系汇报人：朱丽慧上海交通大学2010年10月17日主要内容氧化损伤的机理氧化应激与消化道损伤抗氧化剂对氧化损伤的修复作用展望肠炎01肠蠕动紊乱02急性炎症03心血管疾病04神经紊乱05代谢疾病氧化应激06生物体在代谢过程中，产生许多自由基，这些自由基通常不会导致组织细胞的损伤，机体依靠自身体内的抗氧化防御