病毒与细胞的相互作用课件.pptVIP

*****病毒與細胞的相互作用病毒的細胞培養一、細胞培養的特點1.細胞培養中每個細胞的生理特性一致，對病毒的易感性相等，沒有實驗動物的個體差異，易於進行標準化試驗，重複性好。2.可通過觀察細胞病變判斷結果3.可用於病毒分離和病毒克隆二、細胞培養的類型原代細胞：動物組織經胰酶消化、分散，獲得單個細胞，再生長於培養皿中。二倍體細胞：原代細胞可繼續傳代培養，其染色體與原代細胞一樣，仍為二倍體。傳代細胞系：這類細胞在體外可無限分裂傳代、培養。三、細胞培養的方法1.靜置培養：將消化分散的細胞懸液分裝於培養瓶，封閉，靜置於恒溫箱內，數天後細胞可長成貼壁的單層細胞。2.轉瓶培養：細胞的製備與靜置培養相同，用圓筒型培養瓶，使之不斷緩慢旋轉，幾天後細胞可在細胞瓶壁上長滿單層。3.懸浮培養：通過攪拌使細胞處於懸浮狀態，此法適用於某些不貼壁的細胞系。4.微載體培養：微載體是35-100μm的小顆粒，在細胞中加入這種小顆粒，細胞可貼附其上生長成單層，所獲得的細胞數大為增加。第十二節病毒與細胞的相互作用一、相互作用的類型：殺細胞、非殺細胞二、殺細胞的變化1.涉及細胞膜的CPE：細胞膜與病毒吸附、進入、組裝及釋放有關。細胞膜融合與合胞體的形成是病毒感染的特性。2.涉及細胞骨架的CPE：細胞骨架由微絲、仲介絲及微管組成，與細胞結構的完整性、物質運輸及運動性有關。病毒感染可導致這些結構破壞，細胞崩解。3.細胞凋亡：感染細胞可引起程式性死亡。圖5.正常Marc-145細胞圖6.接種後48小時的CPE圖7.接種後72小時的CPE三、空斑形成空斑試驗（Plaqueassay）：Dulbecco於1952年建立了空斑試驗，將稀釋病毒吸附於單層細胞，而後在細胞單層上覆蓋一層含營養液的瓊脂，防止游離病毒通過營養液擴散，但可在細胞間傳遞。經過幾天培養後，病毒感染點會形成一個斑點。該法可用於病毒的克隆。四、包涵體包涵體（Inclusionbody）：病毒感染細胞後在胞漿內形成的一種光學顯微鏡下可見的特殊結構，富含病毒的區域。大多數包涵體由病毒子組成，少數包涵體是細胞對病毒反應的產物。如狂犬病的Negri氏體。五、病毒的干擾現象概念：一種病毒感染動物機體（或細胞）後能產生抑制其他種病毒感染的作用，稱為病毒的干擾現象。*****