实验二部分清热药的体外抗菌实验.ppt

实验二

部分清热药和大蒜的体外抑菌实验

中兽医教研室沈金阳

学习要求

通过平板打孔法，(1).学习体外抑菌实验的基本操作，(2).了解部分清热药和大蒜的抑菌作用。

背景介绍-1

药物的体外抑菌试验是为了检查药物的抑菌能力。该项试验方法已广泛应用于新药研究和指导临床用药。如抗菌药物的筛选，提取过程的生物追踪、抗菌谱的测定、耐药谱的测定、药敏试验、药物血浓度测定等各个方面。

背景介绍-1

系列稀释法

琼脂扩散法

液体培养基系列稀释法

固体培养基系列稀释法

测定药物的最小抑菌浓度（MIC）

背景介绍-1

系列稀释法

琼脂扩散法

液体培养基系列稀释法

固体培养基系列稀释法

测定药物的最小抑菌浓度（MIC）

滤纸片法

打孔法

挖沟法

管碟法

：抗菌药物的筛选

背景介绍-1

系列稀释法

琼脂扩散法

液体培养基系列稀释法

固体培养基系列稀释法

测定药物的最小抑菌浓度（MIC）

滤纸片法

打孔法

挖沟法

管碟法

：监测抗菌药物血药浓度

背景介绍-1

系列稀释法

琼脂扩散法

液体培养基系列稀释法

固体培养基系列稀释法

测定药物的最小抑菌浓度（MIC）

滤纸片法

打孔法

挖沟法

管碟法

背景介绍-1

系列稀释法

琼脂扩散法

液体培养基系列稀释法

固体培养基系列稀释法

测定药物的最小抑菌浓度（MIC）

滤纸片法

打孔法

挖沟法

管碟法

：测试药物对不同种细菌的抑制

背景介绍-1

系列稀释法

琼脂扩散法

液体培养基系列稀释法

固体培养基系列稀释法

测定药物的最小抑菌浓度（MIC）

滤纸片法

打孔法

挖沟法

管碟法

背景介绍-2

清热药指药性寒凉，以清解里热为主要作用的中药。

背景介绍-3

大蒜

为百合科葱属植物蒜AlliumsativumL.的鳞茎。人工栽培。具有解毒消肿，杀虫，止痢之功效。常用于痈肿疮疡，疥癣，肺痨，顿咳，泄泻，痢疾。

蒜氨酸

大蒜酶

大蒜素

及其他含硫化合物

挥发性

实验操作

一、部分清热药的抗菌实验

观并测量抑菌圈直径（明天12:15）

琼脂平板

（塑料）

100μL大肠杆菌悬液，“L”棒涂匀

均匀打5个孔，

火焰稍加热封底

标记

中药药液加满孔

灭菌水加满孔

37℃培养24h

（206房间）

黄连、黄芩、黄柏、连翘、灭菌水

二、挥发性成分的抗菌实验

2.皿盖中央放倒置无菌青霉素盖，石蜡固定，无菌镊移取少量大蒜泥填满青霉素瓶盖凹陷；

1.取一琼脂平板（玻璃），100μL大肠杆菌悬液，“L”棒涂匀；

3.将琼脂培养皿倒置于盛有大蒜泥的培养皿盖上，切勿接触青霉素盖。放入37℃培养24h，观察并测量抑菌圈的直径；（明天12:15）

4.同上操作，取无菌生理盐水加入青霉素盖凹陷内作为对照组。

大蒜、灭菌水

注意事项

1、全班4组，每组出4位同学各做一块板；

2、所有试验所用菌液、接触菌液的枪头、培养基均应收集到75%乙醇烧杯中，最后集中灭菌处理；

3、操作靠近酒精灯火焰范围；接菌时平板盖不要完全敞开，避免空气中杂菌污染；

4、涂布时，要等涂布棒稍冷再涂布，涂布要均匀；吸取细菌时，要将菌液摇匀。

5、打孔加药时不要使供药液溢出孔。加药后，用记号笔在平板底部做标记，不能标在平板盖上；

6、打孔法和倒牛津杯法培养时培养皿放置方向不一致。

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