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第四節精液保存一、精液的保存方法現行精液保存的方法按保存的溫度分：常溫保存（15-25℃）低溫保存（0-5℃）冷凍保存（-79--196℃）三種。按精液的狀態分：液態保存：常溫保存和低溫保存溫度都在0℃以上，故稱液態精液保存冷凍保存：超低溫保存精液以凍結形式作長期保存，故稱冷凍精液保存。二、低溫保存原理：低溫能抑制精子的代謝和微生物的繁殖，但迅速降溫會使精子遭受冷休克，加低溫保護劑和緩慢降溫並保持較低溫度，可使精液保存數天。稀釋液主要成分：抗生素、15-25%的卵黃、基礎液保存方法：用紗布包數層於裝冰塊的保溫瓶中或冰箱中保存。保存溫度：2-5℃低溫保存的關鍵性環節1、含卵磷脂、抗生素的稀釋液2、等溫稀釋3、緩慢降溫4、保持恒溫（2-4℃）5、在保質期內使用，用前進行活力檢查二、常溫保存原理：精子自身所產生的酸性物質和稀釋液中的酸性物質使精液的PH降低到一定的水準，能夠抑制精子的代謝，從而延長精子的存活時間。抗生素能夠抑制微生物的繁殖。稀釋液成分：抗生素、單糖、緩衝劑保存溫度：15-25℃常溫保存的關鍵1、含緩衝劑、營養、抗生素的稀釋液2、等溫稀釋及緩慢降溫3、保持恒溫（15-25℃）4、防止精子沉澱堆積時間過久5、在保質期內使用，用前進行活力檢查第五節輸精操作一、輸精前的準備（一）輸精器械的準備與精液接觸的用品，必須經過清洗、消毒滅菌，並且不能有任何不利於精子存活的化學物質殘留。用前最好用稀釋液或生理鹽水沖洗，確保對精液無毒害作用。最好一頭母畜準備一個輸精槍或槍頭，一次性輸精器只能一畜一支開膣器最好一畜一個，用前在消毒劑中浸過，用涼開水沖過後，放入乾燥箱中乾燥後，放涼使用（冬季應防止過冷）。（二）精液的準備輸精前應將精液準備好，應確定精液品質符合要求方可用輸精大劑量低溫或解凍後精液，應將溫度升至20-30℃後輸精常溫保存精液不須要升溫小劑量冷凍精液也應正確解凍後輸精（三）母畜的準備牛、馬、羊等家畜輸精前應進行保定，以確保順利輸精。大家畜可保定在輸精欄內或六柱保定架內，羊也可倒提保定。豬輸精前應對母豬進一步發情檢查，並刺激相應部位，以促進母豬產生宮縮，有利順利輸精。由助手將動物的尾部拉向一側，馬輸精前應將尾毛用繃帶紮好，防止帶入陰道內。輸精前應將母畜外陰部用肥皂水清洗後，用清水洗淨，擦幹。母豬的外陰可用幹紙巾擦淨即可。（四）輸精人員準備輸精人員可戴一次性長臂或PE手套操作，也可洗淨雙手即可。操作人員應指甲剪短，銼光馬輸精時手要伸入陰道內，手臂應用75%酒精消毒涼幹後，塗少量石蠟油牛輸精時，手臂要伸入到直腸內，應清洗雙手，戴長臂手套醮少量水或石蠟油或肥皂水，也可不戴手套操作。（一）牛的輸精牛的輸精方法開膣器法直腸把握子宮頸深部輸精法子宮頸口尿道口膀胱卵巢子宮頸子宮體牛的輸精對母牛進行發情鑒定，母牛發情結束，不再爬跨其他母牛，精神趨於穩定時輸精。將母牛保定，尾部拉向一側，外陰用高錳酸鉀水棉球擦拭，並擦幹。將冷凍精液解凍，剪去封口端，剪口端向前放外套管中，輸精器通針向後拉出15釐米。將外套管套在輸精器上。分開外陰，將套管連同外塑膠膜向前上方伸入陰道10釐米，將輸精器捅透外膜。牛的輸精左手（或右手）戴上長臂手套塗少量石蠟油伸入直腸，排出宿糞。手伸至直腸狹窄部後，將直腸向後移，向骨盆腔底下壓，找到子宮頸（棒狀，質地較硬有肉質感，長約10-20釐米。手移至子宮頸後端（子宮頸陰道部），使子宮頸呈水準方向，並用力將子宮頸向前推，使陰道壁拉直，方便輸精器向前推進。右手將輸精器前端伸到子宮頸外口附近，左手配合，使前端對準子宮頸外口。左右手配合，上下調整，使輸精器前端進入子宮體內。牛的輸精等確認輸精器到達子宮體時（短距離前後移動時，沒有明顯阻力），不要再向前推送輸精器。將精液緩慢注入，並慢慢抽出輸精器。注意：輸精器插入陰道時，應向前上方。當遇到阻力時，切忌用蠻力。輸精器插入子宮頸管時，推進力量要適當，以免損傷子宮頸、子宮體粘膜。如果輸精器後端為膠頭，將精液壓子宮內後，不要鬆開膠頭，以免精液流回輸精器內。用移液器注入精液精子計數將計數板固定在顯微鏡的推進器內，用100倍放大找到計數室，再用400倍找到計數室的第一個中方格。計數左上角至右下角五個中方格的總精子數，以精子的頭部為准，依數上不數下，數左右不數右的原則進行計數格線上的精子。進行精子計數的中方格數可以是四角一中心共5個中方格也可以是從左角到右下角五個中方格以圖示次序計數，精子的頭部為准，依數上不數下，數左右不數右的原則進行計數格線上的精子。白色精子不計數計算精子密度精子密度=5個中方格總精子