2.2.1动物细胞培养课件-高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

第2节动物细胞工程第1课时

能说出动物细胞培养的概念、条件。能构建动物细胞培养的流程图。能说出干细胞的类型以及分析干细胞在临床上的应用所产生的效益与风险。

动物细胞工程动物细胞培养动物细胞核移植动物细胞融合动物细胞工程的基础人造皮肤克隆猴：中中和华华单克隆抗体

什么是动物细胞培养？动物细胞培养的条件有哪些？从社会中来

阅读教材P43—44，小组合作思考讨论完成问题。一、动物细胞培养1.什么是动物细胞培养？原理是什么？目的是什么？2.动物细胞培养实际上是在体外模拟体内的生理条件进行的培养，你认为体外培养动物细胞需要满足哪些条件?3.如何维持无菌、无毒的环境？适宜的温度、pH和渗透压分别是多少？适宜的气体环境包括？分别有什么作用？如何保持该气体环境？

1.概念：从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适当的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。动物体组织单个细胞细胞生长和增殖取出分散适宜条件原理地位对象目的细胞有丝分裂动物细胞工程的基础胚胎或幼龄动物的细胞获得细胞或者细胞产物动物细胞培养能体现细胞的全能性吗？

糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境充足的营养、稳定的内环境。将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基含人类未知、细胞生长增殖所必需的物质，满足细胞对未知营养成分的需求。培养基的构成：合成培养基+血清等天然成分一般用液体培养基，也称为培养液2.培养的条件：

糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境①培养液、培养用具：灭菌处理；②无菌操作；③适量添加抗生素定期更换培养液，以便清除代谢物。①适宜的温度：哺乳动物细胞培养的温度多以_______________为宜；②适宜的pH：多数动物细胞生存的适宜pH为______________；③适宜的渗透压：_____________________________维持细胞正常的形态和功能。36.5±0.5℃7.2-7.4

糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境维持培养液的pH95%空气+5%CO2的CO2培养箱O2：细胞代谢所必需CO2培养箱松盖培养瓶培养皿①组成②培养仪器

请同学们自主阅读教材P44-45，小组合作思考讨论完成问题。二、动物细胞培养的过程1.体外培养动物细胞有哪些类型？2.请简述动物细胞培养的过程。3.为什么将取出的组织分散成单个细胞？如何将组织分散成单个细胞？4.什么是细胞贴壁？什么是接触抑制？5.为什么要进行分瓶培养？怎么处理？6.什么是原代培养和传代培养？两种“培养”都用到胰蛋白酶处理，作用对象相同吗？动物体组织单个细胞细胞生长和增殖取出分散适宜条件

1.动物细胞培养的类型：第1类：悬浮生长细胞第2类：贴壁生长细胞（主流）需要贴附于某些基质表面才能生长增殖悬浮培养瓶悬浮在培养液中生长增殖

2.动物细胞培养的过程分瓶取动物组织用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理分散成单个细胞加培养液制成细胞悬液原代培养在培养皿或培养瓶中传代培养细胞分裂受阻悬浮生长贴壁生长密度过大、有害代谢物积累和营养物质缺乏等原因接触抑制原因解决办法传代培养放入CO2培养箱中培养取动物组织制成细胞悬液转入培养液进行原代培养放入CO2培养箱中培养

传代培养悬浮培养的细胞:直接用离心法收集贴壁细胞:用胰蛋白酶处理分散成单个细胞，再用离心法收集②制成细胞悬液，分瓶培养①收集细胞加培养液传代培养（视频）

结合上图思考思考1.常用胰蛋白酶分散细胞，这说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？说明细胞间的物质主要是蛋白质胃蛋白酶作用的适宜pH约为2，当pH大于6时，胃蛋白酶就失去活性，多数动物细胞培养的适宜pH为7.2～7.4，胃蛋白酶在此环境中没有活性，所以用胃蛋白酶不行。

结合上图思考思考2.用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理组织块，使组织分散成单个细胞的目的是什么？①使细胞与培养液充分接触，一方面保证细胞所需氧气和营养的供应，另一方面，另一方面保证细胞内代谢产物的及时排出。②使得在细胞水平操作的其他得以实现。思考3.实验过程中，胰蛋白酶处理时间过长，会出现什么结果？细胞膜的成分中含有蛋白质，而胰蛋白酶能够水解蛋白质，因此，胰蛋白酶会把细胞消化掉。因此，胰蛋白酶处理的时间不能太长。

结合上图思考思考4.原代培养和传代培养的鉴定原代培养传代培养细胞株细胞系遗传物质改变遗传物质有的改变多数细胞固定在表面生长和分裂随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖细胞悬浮液10代细胞50代细胞无限传代培养危机：危机1危机2

区分两种“培养”的关键是看用胰蛋白酶处理的对象用胰蛋白酶对剪碎