动物细胞制药课件.pptVIP

動物細胞制藥

第一節概述細胞學說的建立組織培養和細胞培養細胞工程學

第二節動物細胞的形態

和生理特點一、動物細胞的形態適應功能,形態各異。離體培養細胞分兩類：貼壁細胞懸浮細胞

⒈貼壁細胞生長須有貼附的支持物表面，自身分泌或培養基中提供的貼附因數才能在該表面上生長。兩種形態：成纖維細胞型上皮細胞型

⒉懸浮細胞生長不依賴支持物表面，在培養液中呈懸浮狀態生長。如淋巴細胞。⒊兼性貼壁細胞生長不嚴格依賴支持物。如中國地鼠卵巢細胞，小鼠L929細胞。

二、動物細胞的生理特點⒈細胞的分裂週期長細胞分裂時間為12～48h，細胞的分裂週期=間期+分裂期間期（G1+S+G2）分裂期（M）

G1期：4～6h合成DNA聚合酶RNA合成S期：6～8hDNA合成G2期：2～5hDNA量加倍,RNA合成M期：0.5～1h染色體分裂

細胞代數為細胞分裂次數傳代數表示細胞培養分種傳代次數細胞代數=傳代數×分種數/2X=(logN-logNo)÷log2X代數N培養最終細胞數No培養起始細胞數倍增時間=培養經過時間÷代數

⒉細胞生長需貼附於基質,並有接觸抑制現象。⒊正常二倍體細胞的生長壽命是有限的。原代培養有限細胞系無限細胞系

⒋動物細胞對周圍環境十分敏感;對理化因素敏感，如：滲透壓、pH、離子濃度、剪切力、微量元素等。

⒌動物細胞對培養基要求高必需氨基酸、維生素、無機鹽、微量元素、葡萄糖、細胞生長因數、貼壁因數等。

⒍動物細胞蛋白質的合成途徑和修飾功能與細菌不同。動物細胞蛋白質的合成部位：游離核糖體粗面內質網的核糖體

游離核糖體合成蛋白質用於細胞質基質內。粗面內質網的核糖體合成蛋白質是分泌的和膜中的整合蛋白多為糖蛋白。

動物細胞生產藥物缺點:培養條件高、成本貴、產量低。優點:分泌胞外、純化方便、翻譯後修飾糖基化，與天然產品一致。

第三節生產用動物細胞的

要求和獲得一、生產用動物細胞的要求原代細胞二倍體細胞系轉化細胞系

二、生產用動物細胞的獲得⒈原代細胞是直接取自動物組織器官,經過粉碎消化而獲得的細胞懸液（109/g）。需要大量動物，費錢費勞力。雞胚細胞、原代兔腎細胞、鼠腎細胞、淋巴細胞。

⒉二倍體細胞系原代細胞經過傳代篩選克隆，從多種細胞成分的組織中，挑選並純化出某種具有一定特徵的細胞株。

二倍體細胞有正常細胞的特點：①染色體組型是2n核型；②貼壁依賴接觸抑制；③可傳代培養50代；④無致瘤性。二倍體細胞

⒊轉化細胞系通過某個轉化過程形成的，常由於染色體斷裂變成異倍體，失去正常細胞特點，而獲得無限增殖能力。轉化過程可以是自發的，和人工的，從腫瘤組織中。

三、常用生產用動物細胞

的特性W1-38：正常胚肺組織人二倍體細胞系。核型為2n=46。成纖維細胞，能產生膠原，培養基用BME（Eagle’Basalmedium）。

10%小牛血清，pH7.2,同工酶為G6PDB型。倍增時間為24h，有限壽命50代。安全，用於製備疫苗。

MRC-5：從正常男性肺組織中獲得的人二倍體細胞系。核型為2n=46。屬成纖維細胞。培養基用加小牛血清。同工酶G6PDB型。

有限壽命42～46代。增殖速度較W1-38快，對不良環境敏感性較W1-38低。對人的病毒敏感。用於生產疫苗。

CHO-K1：從中國地鼠卵巢中分離的上皮樣細胞。核型：2n=20～22。培養基：DEME培養基0.1mmol/L次黃嘌呤，0.1mmol/L胸苷，10%小牛血清，加入脯氨酸。

BHK-21:從5只無性別的生長1天的地鼠幼鼠腎臟中分離的;成纖維樣細胞,核型為2n=44;培養基為DMEM加7%胎牛血清。用於增殖病毒，包括多瘤病毒、口蹄疫病毒、狂犬病毒等並製作疫苗，現已用於工程細胞構建。

用於增殖病毒，包括多瘤病毒、口蹄疫病毒、狂犬病毒等並制作疫苗，現已用於工程細胞構建。

Vero：從正常成年非洲綠猴腎臟分離的。為貼壁依賴的成纖維細胞，核型2n=60；

培養基為199培養基，加5%胎牛血清；用於增殖病毒，包括多瘤病毒、脊髓灰質炎、狂犬病毒。

Namalwa：從肯雅患有淋巴瘤病人獲取，建成的人的類淋巴母細胞