第三节高效液相色谱法28讲解.pptx

;外标法可分为工作曲线法、外标一点法、外标两点法。

1.标准曲线法

2.外标一点法;五、应用实例

三黄片（小片）中大黄素和大黄酚的含量测定;1、色谱条件与系统适用性实验

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

以甲醇-0.1%磷酸溶液（85：15）为流动相；

检测波长254nm；

理论板数按大黄素峰计算不低于2000;2、对照品溶液的制备

分别精密称取大黄素对照品0.02509g和大黄酚对照品0.06286g，置25ml量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）的混合溶液溶解，并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置100ml量瓶中，加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）的混合溶液至刻度，摇匀，即得。

;3、供试品溶液的制备

取本品20片，除去包衣，精密称定（W=5.3100g），研细（过三号筛），取约0.26g，精密称定W供=0.2610g，置锥形瓶中，精密加入乙醇25ml，稳定重量，加热回流1小时，放冷，用乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续液10ml，置烧瓶中，蒸干，加30%乙醇-盐酸（10:1）的混合溶液15ml，置水浴中加热水解1小时，立即冷却，用三氯甲烷强力振摇提取4次，每次15ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣用加无水乙醇-乙酸乙酯（2:1）的混合溶液溶解，转移至25ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

;五、应用实例

三黄片（小片）中大黄素和大黄酚的含量测定;第三节高效液相色谱法;第三节高效液相色谱法