CN114533763A-一种新型体外培育牛黄电结石方法配方技术专利.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利申请

(10)申请公布号CN114533763A

(43)申请公布日2022.05.27

(21)申请号202210145172.2

(22)申请日2022.02.17

(71)申请人肖德煊

地址061000河北省沧州市运河区水月寺南街华西小区4栋1单元602号

(72)发明人肖德煊王彦博

(74)专利代理机构沧州市国瑞专利代理事务所(普通合伙)13138

专利代理师湛海耀

(51)Int.Cl.

A61K35/413(2015.01)C12N1/20(2006.01)

C12N9/24(2006.01)C12R1/19(2006.01)

权利要求书2页说明书11页附图1页

(54)发明名称

一种新型体外培育牛黄电结石方法(57)摘要

CN114533763A本发明涉及中药原料药制备的技术领域，特别是涉及一种新型体外培育牛黄电结石方法，提供一种可以有效地提高胆汁酶促反应效率，缩短整体发酵时间，生产步骤简洁，提高牛黄体外凝结效率，降低能耗，安全性更高，得到的体外培育牛黄有效成分优于天然牛黄，达到中国药典2020年版对体外培育牛黄的要求；包括：S1胆汁处理；S2菌种繁殖：将大肠杆菌甘油菌种接种于扩增繁殖液体培养基中恒温培养6～7h；S3酶促反应：胆汁中加入发酵菌液水浴加热恒温震荡1～2h；S4灭菌处理；S5过滤沉淀；S6制备可聚沉胆汁胶体；S7凝结核准备：将牛黄颗粒插入针状银质电极负极，并浸泡至5％的稀盐酸中；S8牛黄电结石：将正负极同时插入至胆汁胶体中，控制牛黄颗粒缓

CN114533763A

CN114533763A权利要求书1/2页

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1.一种新型体外培育牛黄电结石方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、胆汁处理：将新鲜牛胆汁过滤去除残留的肝胆组织，并将过滤后的胆汁水浴加热至96～98℃,保持10min，然后降温至36～38℃备用；

S2、菌种繁殖：将大肠杆菌甘油菌种接种于扩增繁殖液体培养基中，并在36～38℃下恒温培养6～7h，得到发酵菌液；

S3、酶促反应：每1000ml处理后的胆汁中加入50ml发酵菌液，混合均匀后，在36～38℃下水浴加热恒温震荡1～2h，进行酶促反应；

S4、灭菌处理：将经过酶促反应后的胆汁加热至96～98℃,维持30min，完成高温灭菌，并使残留的酶失活，得到灭菌胆汁；

S5、过滤沉淀：每1000ml灭菌胆汁中添加1.5g氢氧化钙固体，充分搅拌后，加入灭菌胆汁等体积的纯水进行稀释，最后将其中的沉淀物过滤出来；

S6、制备可聚沉胆汁胶体：将干燥沉淀物与胆红素、胆酸、去氧胆酸、硫酸锌、硫酸镁和偏重亚硫酸钠混合均匀后，每1000ml过滤后的灭菌胆汁中添加700～2000g的混合物，搅拌混合得到浑浊的胆汁胶体；

S7、凝结核准备：将直径3mm的牛黄颗粒插入直径0.05mm的针状银质电极，并将牛黄颗粒浸泡至5％的稀盐酸中；

S8、牛黄电结石：将插有牛黄颗粒的针状银质电极接入负极，另一针状银质电极接入正极，将正负极同时插入至待凝结的胆汁胶体中，并控制牛黄颗粒缓慢转动，直至牛黄颗粒停止变大，将其取出并浸入至5％稀盐酸中，重复上述步骤直至牛黄颗粒不再变大；

S9、后处理：将培育后的牛黄颗粒取下后冷冻，并干燥处理。

2.如权利要求1所述的一种新型体外培育牛黄电结石方法，其特征在于，所述S2中所用的扩增繁殖液体培养基由质量比为1：1：1的LB肉汤培养基、EC肉汤培养基和胰酪大豆胨液体培养基混合均匀而成。

3.如权利要求1所述的一种新型体外培育牛黄电结石方法，其特征在于，在S5中过滤沉淀采用400目滤网过滤，过滤出的沉淀物放入至真空干燥箱中，0.085Mpa干燥24h。

4.如权利要求1所述的一种新型体外培育牛黄电结石方法，其特征在于，所述S6中的干燥沉淀物与其他物料的使用质量份数为：

5.如权利要求1所述的一种新型体外培育牛黄电结石方法，其特征在于，所述S7和S8中，牛黄颗粒在5％的稀盐酸中的浸泡时间均为2～3min。

CN114533763A权利要求书2/2页

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6.如权利要求1所述的一种新型体外培育牛黄电结石方法，其特征在于，所述S8中，正

负极之间的距离为5～7cm，并且正负极通电电压为750～1300V，电流为25～30mA，并且正负极的通电电压和电流随着正负极之间距离的增加而增大。

7.如权利要求1所述的一种新型体外培育牛黄电结石方法，其