植物激素生物测定.ppt

2、苋红素合成法*植物激素的生物测定*植物激素(planthormones,phytohormones)是指在植物体内合成的、通常从合成部位运往作用部位、对植物的生长发育产生显著调节作用的微量小分子有机质。植物体内激素的含量甚微，7000～10000株玉米幼苗顶端只含有1μg生长素；1kg向日葵鲜叶中的玉米素(一种细胞分裂素)约为5～9μg。第五章：植物激素的生物测定*由于植物体内植物激素含量很少，难以提取，无法大规模在农业生产上应用。随着研究的深入，人们合成(或从微生物中提取)了多种与植物激素有相似生理作用的物质，称为植物生长调节剂(plantgrowthregulators)。第五章：植物激素的生物测定*五大类植物激素是：生长素类、赤霉素类（见下图）、细胞分裂素类、脱落酸和乙烯。第五章：植物激素的生物测定*植物激素的测定分析采用薄层层析(thinlayerchromatography,TLC)、气相色谱(gaschromatography,GC)、高效液相层析(highperformanceliquidchromatography,HPLC)和质谱分析(massspectrography,MS)等，其原理大都是基于不同物质在不同介质中有不同的分配系数。第五章：植物激素的生物测定*免疫分析法被用来定性、定量测定各种植物激素，它是基于动物体对进入其血液的外来物质的免疫性。抗原通常是蛋白质，植物激素如生长素不是抗原，但只要把它们化学结合到蛋白质分子上(如人血清蛋白)，就可转化成抗原分子，当将此抗原注射到兔子中，几十天后便会形成对生长素的专一抗体。第五章：植物激素的生物测定*生物测定法是通过测定激素作用于植株或离体器官后所产生的生理生化效应的强度，从而推算植物激素含量的方法。第五章：植物激素的生物测定*植物激素的生物测定法要求有较强的专一性,较高的灵敏性和较短的实验周期,尤其是对粗提物的未知激素的粗筛,常可得到定性定量的相对结果。测定时,对环境条件和植物材料都有较严格的要求。一、生长素的生物测定方法*生长素的生物测定技术最早是基于生长素对细胞伸长的促进作用,所用材料为燕麦或小麦胚芽鞘、豌豆茎和番茄下胚轴等。由于生长素也能促进细胞分裂和分化,所以又发展出菊芋块根称重法和绿豆根法。一、生长素的生物测定方法*一、生长素的生物测定方法*1、燕麦弯曲法*燕麦种子在黑暗中萌发,当根达到2mm时,将幼苗固定在支柱上,使其在水培条件下生长。选择直的幼苗切去胚芽鞘顶端,将切下的胚芽鞘尖放在琼脂薄片上,使其中的生长素扩散到琼脂中。24h后移开鞘尖,将琼脂切成1mm3的小块。约3h后将切去尖端的胚芽鞘（内有第一片叶)再切去4mm尖端(这是因为切去后还会产生新的顶端),用镊子轻轻地将第一片叶向上提一下。将含有生长素的琼脂块轻放在去尖胚芽鞘的一侧靠近叶片的部位。经过一段时间(90-110min)进行投影(shadowgraph),测量弯曲角度。在一定浓度范围内，弯曲度与生长素浓度成直线关系。2、小麦胚芽鞘伸长法*生长素具有促进细胞伸长的作用,将小麦胚芽鞘伸长部分切成段,漂浮在溶液麦面上,一定时间后观察切段的伸长。此法具有较高的灵敏度,操作简便,实验数值偏差小，且与人工合成生长素也能起反应,所以特别适用于伸长生长的机理研究。2、小麦胚芽鞘伸长法*3、绿豆生根法*STEP3STEP2STEP1绿豆生根试验法是基于插条不定根生长的数量与生长素浓度间的关系而设计的。在一定的生长素范围内，不定根数量与生长素浓度成正比。用标准生长素溶液作对照，就可测出某一类生长素物质的效价或某一提取液中内源生长素的浓度。此法效果灵敏、操作简便。3、绿豆生根法*二、赤霉素的生物测定方法*赤霉素的生理效应促进器官的伸长，打破休眼，促进发芽、开花，对矮生型作物伸长生长，赤霉素效果尤其明显二、赤霉素的生物测定方法*1、水稻幼苗叶鞘伸长“点滴”法*此法的原理是赤霉素可促进幼嫩植物节间伸长，在一定的浓度范围内（0.1-1000mg/L，叶鞘的伸长与赤霉素浓度成正比。1、水稻幼苗叶鞘伸长“点滴”法*2、大麦胚乳法*大麦种子吸水萌动后，胚中产生的赤霉素将胚乳最外的糊粉层中的α-淀粉酶激活。无胚的大麦半粒种子不能产生赤霉，因此没有α-淀粉酶活性。它被成功地应用于赤霉素类物质的测定。2、大麦胚乳法*3、矮生玉米叶鞘法*以赤霉素浓度的对数为横坐标,叶鞘长度的对数为纵坐标。三、细胞分裂素的生物测定法*诱导素的合成，即苋红素的合成。06细胞扩大，即体积的增加；04细胞分裂素(c