DB22T 2912-2018 贝类中霍乱弧菌检测 微滴数字PCR法.pdfVIP

ICS67.120.30

B50

DB22

吉林省地方标准

DB22/T2912—2018

贝类中霍乱弧菌检测微滴数字PCR法

DeterminationofVibriocholeraeinshellfish-dropletdigitalPCRmethod

2018-11-12发布2018-12-30实施

吉林省市场监督管理厅发布

DB22/T2912—2018

前言

本标准按照GB/T1.1-2009和GB/T20001.4-2015给出的规则起草。

本标准由长春海关（原吉林出入境检验检疫局提出并归口）。

本标准起草单位：长春海关（原吉林出入境检验检疫局验检疫技术中心）、延边海关综合服务技术

中心（原延边出入境检验检疫局技术中心）。

本标准主要起草人：罗雁非、孙佳、杜佳剑、聂丹丹、丁旭、王准、曲辉、彭勃。

I

DB22/T2912—2018

贝类中霍乱弧菌检测微滴数字PCR法

警示——使用本标准的人员应有正规实验室工作的实践经验。本标准并未指出所有可能的安全问

题。使用者有责任采取适当的安全和健康措施，并保证符合国家有关法规规定的条件。

1范围

本标准规定了贝类中霍乱弧菌检测微滴数字PCR法的试剂和材料、仪器和设备、样品、试验步骤和

试验数据处理与防止污染措施。

本标准适用于贝类中霍乱弧菌检测。

2规范性引用文件

下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文

件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB4789.1-2016食品安全国家标准食品卫生微生物检验总则

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

GB/T19495.3转基因产品检测核酸提取纯化方法

SN/T1022进出口食品中霍乱弧菌检验方法

SN/T2425-2010进出口食品中霍乱弧菌快速及鉴定监测方法实时荧光PCR方法

WS/T230-2002临床诊断中聚合酶链反应（PCR）技术的应用

3原理

微滴式数字PCR平台通过产生微小油包水体系实现反应体系的分割，根据霍乱弧菌的溶血性特异性

基因序列对贝类中霍乱弧菌进行鉴定。经PCR扩增后，根据泊松分布原理及阳性微滴的个数与比例即可

得出靶分子的起始拷贝数或浓度，实现对霍乱弧菌的快速定性检测。

4试剂和材料

除另有规定外，所有试剂均为分析纯。实验用水符合GB/T668中二级水的要求。

4.1裂解液,成分包括：2%CTAB(cetyltrithylammoniumbromide，十六烷基三甲基溴化铵)，100

mmol/LTris(trishydroxymethylaminomethane，三羟甲基氨基甲烷)，1.4mol/LNaCl，20mmol/L

EDTA(ethylenediaminetetraaceticacid，乙二胺四乙酸)，用HCl调至pH8.0。

4.2酚/氯仿/异戊醇（25:24:1，v/v/v）。

4.3氯仿。

4.4异戊醇。

4.5无水乙醇。