石蜡切片技术.ppt

第二节组织的固定第23页，共46页，星期日，2025年，2月5日一、固定的意义概念：固定是指将各种组织浸入防腐剂内，使细胞内的物质为不溶性。固定的作用即是用一种方法将组织尽可能保持在它原来的形态，且能适于某些研究程序凡是需要制作作病理检验标本的各种组织，无论是制作切片标本，还是制作巨体标本，首先必须固定。在制作切片过程中，固定最为重要的步骤，一张优秀的组织学切片是建立在适当而完全的固定基础之上的。固定不良在以后制片的任何阶段皆不能补救。因此制片的优劣首先取决于最初固定适当与否。第24页，共46页，星期日，2025年，2月5日重要的是，被固定组织在动物死后或从活体切取后要尽可能立即固定。及时的取材给迅速固定提供了先决条件。如果不迅速固定，造成固定不良，将导致染色不良后果。组织的良好固定，应该是一次性的；某些固定剂还具有助染的作用，可使细胞各部易于着色。固定不良的组织，即使进行补充固定也起不到改善染色的效果。第25页，共46页，星期日，2025年，2月5日二、固定的目的和效果固定组织的目的是设法得到接近正常生命状态的细胞结构，有人说“形态学的美是良好固定产物”，这说明固定的特殊重要作用。第26页，共46页，星期日，2025年，2月5日1、抑制自溶和腐败：组织的固定能保持细胞与生活时的形态相似。因为当机体生命活动停止、或局部器官、组织割离机体之后，组织细胞的代谢功能即行丧失，新鲜组织如果不经固定，任意放置，由于细胞内酶对蛋白质的分解，以及细胞的孳生等各种因素的作用，则易因细菌繁殖而致组织腐烂。细胞内的蛋白质分解酶将蛋白质分解为氨基酸后脱离细胞而引起组织的自溶。2、保存：细胞经过固定，不但可以防止自溶和细菌性腐败，而且能沉淀或凝固组织内的各种成份和病理代谢产物，如蛋白质，脂及脂蛋白、脂肪、糖类、色素，其它碳水化合物，无机成份，微生物等都可以经过固定而保存下来，并在制片过程中不为其他试剂溶解破坏。第27页，共46页，星期日，2025年，2月5日3、硬化：固定剂的硬化作用能使柔软组织（如脑）的质地变硬而易于操作。4、胶质物体的固化：固定能使细胞正常的半液体状（溶胶）变为不能逆转的固体状（凝胶）粘度。5、肉眼鉴别：固定可将各种细胞和组织成分的析光率作不同程度的改变，增强组织的析光指数，这样能使各种染色成份较之未固定时更容易辨认。第28页，共46页，星期日，2025年，2月5日6、对染色的影响：某些固定剂尚具有一定的媒染作用而增进染色（如苦味酸对于染色的媒染作用）可使细胞各种部位易于着色，所以组织固定后有利于制片染色和在显微镜下的观察。此外，固定剂有时也会影响染色效果，导致着色效果不理想（如福尔马林对水溶猩红染色的影响）。7、渗透和固定：固定还可以使组织和细胞的各种渗透压不再发生改变，在制片时就能在最大范围内保持组织和细胞的原来形态。第29页，共46页，星期日，2025年，2月5日三、固定的方法及注意事项：为使组织固定充分，应做到固定容器要合适、固定时间要充足，固定液量要足够。合适容器固定组织时，应选择合适的容器、一般容器的容积是组织的10-15倍以上。标本瓶应选择瓶口较大的为宜，这样便于固定后的标本经小口瓶硬塞进去，这样不仅不利于标本易于取出，还可能造成人为挤压组织而致形态变化，对大件的标本应按巨检常规切片后放于容器固定。第30页，共46页，星期日，2025年，2月5日充足时间组织固定的时间要足够，根据标本体积大小不同，固定时间应有所不同，组织越大越厚，固定时间应越长，反之。一般4-12小时或更长。在温箱内将固定液稍加温，可使固定作用加快而缩短固定时间。足量的固定液固定组织时，应该使用足量的固定液，多比少好，一般应为组织体积的5-10倍，最少也不应于五倍。标本最好悬浮于固定液之中。如标本块多时，固定时不应重叠。不要先将标本块放入容器后再注入固定液，以免标本贴付于器皿。第31页，共46页，星期日，2025年，2月5日标本如不能及时制片，应改换适当的保存液。在配制混合液时，氧化剂不能与还原剂混合，以免引起化学反应，失去固定作用。对于某些需要制作神经染色和酶反应等组织的固定，要求较一般严格，组织的大小，固定的时间，温度的适当都应慎重考虑，尤其是对于酶反应的固定液，一般都要置于冰箱，在低温的条件下进行固定。固定不好，是得不到满意的切片和合乎标准的反应效果的。任何固定液对人体都有损害作用，因此固定液的容器必须密闭，以防挥发损伤器官和眼睛，忌用手与固定剂直接接触，以免损伤皮肤。第32页，共46页，星期日，2025年，2月5日四、固定剂的选择理想的固定剂应该具备下列几种性能：1、渗透性强：固定剂必须能迅速渗入组织，这样组织内各种成分才能尽快地被固定在原位置，而不致