2.2动物细胞工程 课件 高二下学期生物人教版选择性必修3.pptx

2.2动物细胞工程（一）——动物细胞培养

动物细胞工程常用的技术手段动物细胞培养动物细胞融合单克隆抗体动物细胞核移植是其他动物细胞工程技术的基础应用应用克隆动物

一、动物细胞培养的条件二、动物细胞培养的过程三、干细胞培养及其应用动物细胞培养

1、动物细胞培养的概念从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。2、对象一般取材于动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。原因：3、地位其他动物细胞工程的基础细胞分化程度低，增殖能力强，有丝分裂旺盛，容易培养。4、原理细胞增殖（有丝分裂）5、目的获得细胞或者细胞产物

一般来说，动物细胞培养（模拟体内细胞正常生长增殖的环境）需要满足以下条件：动物细胞培养所需的基本条件营养物质其他条件糖类氨基酸无机盐维生素无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境

1、营养将细胞所需的营养物质（糖类、氨基酸、无机盐、维生素等）按种类和所需量严格配制的培养基。（1）培养基构成：合成培养基血清等一些天然成分＋合成培养基：血清等一些天然成分：含有尚未研究清楚的细胞所需的营养物质（2）培养基类型（物理性质）：液体培养基（培养液）【思考】动物细胞培养为什么需要加血清？血清可提供一个类似生物体内的环境，其中还含有必需氨基酸、激素、酶、多种未知的促细胞生长/贴附因子等多种活性物质，可促进细胞生长和增殖。

2、无菌、无毒的环境无菌：①对培养液和所有培养用具进行灭菌处理②在无菌环境下进行操作③添加一定量的抗生素定期更换培养液。无毒：问题2：定期更换培养液的目的是什么？以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害问题1：如何防止培养过程中的微生物污染？在细胞培养液中添加一定量的抗生素

3、温度、pH和渗透压多数动物细胞生存的适宜pH为____________________①适宜的温度：36.5±0.5℃7.2-7.4（中性或弱碱性）维持细胞正常的形态和功能哺乳动物细胞培养的温度多以_________________为宜；维持适宜渗透压的目的______________________________________②适宜的pH：③适宜的渗透压：

松盖培养瓶CO2培养箱培养皿4、气体环境（3）在细胞培养时，通常采用培养皿或松盖培养瓶，并将它们置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。（1）O2：细胞代谢所必需的（有氧呼吸）（2）CO2：主要作用是维持培养液的pH并不是95%氧气

一、动物细胞培养的条件二、动物细胞培养的过程三、干细胞培养及其应用动物细胞培养

取动物组织制成细胞悬液转入培养液进行原代培养分瓶进行传代培养取动物组织制成细胞悬液转入培养液进行原代培养放入CO2培养箱中培养传代培养放入CO2培养箱中培养细胞贴壁接触抑制机械法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理分散成单个细胞

（1）培养前，为什么要将动物组织分散成单个细胞？①分散不会限制彼此的生长和增殖；②利于从培养液中获得营养，排出代谢废物。（2）怎样将动物组织分散成单个细胞？机械的方法或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间。①说明细胞间的物质主要是什么成分？主要是蛋白质(胶原蛋白等)②用胃蛋白酶可以吗？不可以，因为动物细胞培养适宜的PH为7.2～7.4，此环境下胃蛋白酶（1.5～2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2～8.4)的活性较高。（3）分散成的单个细胞，如何培养？用培养液将细胞制成细胞悬液，放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养。

（1）悬浮生长类：能够悬浮在培养液中生长增殖。体外培养的动物细胞类型会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻。悬浮培养瓶培养一段时间后，细胞分裂会受阻，为什么？

（2）贴壁生长类：需要贴附于某些基质表面才能生长增殖（细胞贴壁），大多数细胞属于此类。除受密度、有害代谢物、营养物质影响外，还会发生接触抑制现象。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附细胞分裂受阻抑制分瓶培养解除方法细胞分裂受阻抑制如何解除？

①原代培养：通常将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养。②传代培养：将分瓶后的细胞培养成为传代培养。【思考】动物细胞的整个培养过程中可能多次用到胰蛋白酶或胶原蛋白酶。第一次使用的目的是使组织细胞分散开；贴壁细胞传代培养时使用的目的是使细胞从瓶壁上脱离下来，分散成单个细胞，便于分瓶后继续培养。判断依据：是否分瓶！

动物体组织单个细胞细胞生长和增殖取出分散成适宜条件加培养液细胞悬浮液培养放入培养瓶在