《卫生微生物学检验》课件——02-水中菌落总数测定.pptxVIP

水中菌落总数测定

2

水中菌落总数的测定

检验依据：GB/T5750.12-2023

方法：平皿计数法

实验目的

3

掌握生活饮用水菌落总数的测定方法

掌握水源水菌落总数的测定方法

判定水被细菌污染的程度和水的卫生质量

知识准备

4

菌落总数（Standardplated-countbacteria)

在一定条件下，经一定时间培养后所得1mL水样中的微生物菌落个数。

实验方法

5

实验器材

水样

1、4号—自来水

2、5号—水源水

3、6号—桶装水

培养基

营养琼脂培养基

实验方法

6

设备、器材

无菌工作台、酒精灯、灭菌吸管、灭菌试管、稀释液、灭菌平皿、恒温培养箱、高压蒸汽灭菌器、菌落计数器、天平、电炉等；

实验方法

检验程序

实验方法

生活饮用水

——用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中

水源水

吸取1mL充分混匀的水样，注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀制成1:10稀释液；

吸取1:10的稀释液1mL注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀制成1:100稀释液；

按同法依次稀释成1:1000,1:10000稀释液等备用；

根据对水样污染情况的估计，选择3个适宜稀释度进行检测；

实验方法

检验程序

注意事项

10

每递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管

每个稀释度制作2个平皿

同时做空白试验

注意事项

11

倾注营养琼脂培养基

温度：46℃左右

用量：15mL~20mL

培养

温度：36士1℃

时间：48士2h

注意事项

12

无菌操作；

进行稀释时,吸管口不得与下一个稀释液接触；

从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间不宜超过15min；

稀释倍数愈高菌落数愈少，稀释倍数愈低菌落数愈多。如出现逆反现象，不可作为水样计数报告的依据；考虑水中含抑菌物质

应提前作好稀释用试管和各稀释度培养皿的标记；

若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效；

实验结果

13

实验结果

14

菌落计数及报告方法

记下各平板的菌落数后，求出同一稀释度两个平板的平均菌落数

选择平均菌落数在30~300之间者进行计算

不同稀释度的选择及报告方法

15

只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告（见表中实例1）

实例

不同稀释液的平均菌落数

菌落总数

（CFU/mL）

报告方式

（CFU/mL）

10-1

10-2

10-3

1

1365

164

20

16400

16000

不同稀释度的选择及报告方法

16

若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30~300之间，则视二者之比值来决定（见表中实例2、3、4）

实例

不同稀释液的平均菌落数

两个稀释度菌落数之比

菌落总数

（CFU/mL）

报告方式

（CFU/mL）

10-1

10-2

10-3

2

2760

295

66

1.6

37750

38000

3

2890

271

60

2.2

27100

27000

4

150

30

8

2

1500

1500

不同稀释度的选择及报告方法

17

若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中实例5）

实例

不同稀释液的平均菌落数

菌落总数

（CFU/mL）

报告方式

（CFU/mL）

10-1

10-2

10-3

5

多不可计

1650

513

513000

510000

不同稀释度的选择及报告方法

18

若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中实例6）

实例

不同稀释液的平均菌落数

菌落总数

（CFU/mL）

报告方式

（CFU/mL）

10-1

10-2

10-3

6

27

11

5

270

270

不同稀释度的选择及报告方法

19

若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则应以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表中实例7）

实例

不同稀释液的平均菌落数

菌落总数

（CFU/mL）

报告方式

（CFU/mL）

10-1

10-2

10-3

7

多不可计

305

12

30500

31000

不同稀释度的选择及报告方法

20

若所有稀释度的平板上均无菌落生长，则以未检出报告之

不要用“多不可计”报告

21

实例

不同稀释液的平均菌落数

两个稀释度菌落数之比

菌落总数

（CFU/mL）

报告方式

（CFU/mL）

10-1

10-2

10-3

1

1365

164

20

---

16400

16000或1.6×104

2

2760

295

66

1.6

37750

38000或3.8×104

3

2890

271

60

2.2

27100

27000或2.7×104

4

150

30

8

2

1500

1500或1.5×103