《卫生微生物学检验》课件——07-霉菌、酵母菌数的测定.pptxVIP

霉菌、酵母菌数的测定

实验目的

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学习并掌握观察霉菌形态的基本方法；

初步了解霉菌的形态特征；

学习并掌握霉菌的制片和简单染色基本技术。

实验原理

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霉菌：

呈菌线体形态，但霉菌的菌丝和孢子比放线菌的粗得多；

霉菌的菌落形态较大，质地疏松，外观干燥，不透明，菌落与培养基间连接紧密，不易挑取，菌落正反面，边缘与中心的颜色、构造通常不一致，有霉味；

菌丝的孢子较大，在低倍镜下即可清晰观察到有隔或无隔菌丝和孢子及巨大的孢子囊

实验原理

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乳酸石炭酸棉蓝染色液：

用此染液做霉菌制片的特点是细胞不变形，具有杀菌、防腐作用，不易干燥，能保持较长时间，能防止孢子四处飞散，棉蓝具有一定的染色作用，染液的蓝色能增大反差。（如果用水封片，常因渗透作用而膨胀，水也易使菌丝、孢子和气泡混为一团，影响观察。）

实验方法

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直接制片观察：

在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液。

用镊子从生长有霉菌的斜面挑取霉菌菌丝

用50%的乙醇浸润，洗去脱落孢子再用蒸馏水将浸过的菌丝洗一下

放入载玻片上的液滴中，仔细地用解剖针将菌丝分散开来。

盖上盖玻片（勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片）。

镜检：先用低倍镜。再转换高倍镜镜检并记录观察结果

实验方法

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透明胶带法：

在载玻片上滴加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液；

食指与拇指黏在一段透明胶带两端，使胶带呈U形，胶面朝下；

胶面轻触霉菌表面；

将黏在胶面的菌体浸入载玻片上的乳酸石碳酸棉蓝溶液中，并将胶带两端固定在载玻片两端；

低倍镜、高倍镜镜检

注意事项

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注意取菌时，镊子取菌、解剖针挑取少量菌丝时，尽量减少菌丝断裂及形态破坏；

盖盖玻片勿使产生气泡，且不要再移动盖玻片；

尽可能将菌丝分开，以免菌丝太厚，不易于显微镜观察；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察；

注意无菌操作，且挑取菌丝前镊子和接种环要在酒精灯上灼烧灭菌；

本次实验安排

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霉菌染色形态观察，绘图标本中菌形态特征；

孟加拉红培养基（霉菌和酵母菌质控品接种培养）

蛋白胨在培养基中作为营养物质提供菌体生长所需氮源等；葡萄糖作为能源；磷酸盐作为缓冲剂；镁盐促进菌体细胞的生长；孟加拉红可抑制细菌的生长，也可限制繁殖快的霉菌菌落的大小和高度，此外还作为着色剂，霉菌或酵母菌吸收后便于菌落的观察；氯霉素为抗生素可抑制细菌的生长；琼脂作为凝固剂。

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