植物组织培养第四章胚胎培养和离体授粉.ppt

二、影响因素（四）胚乳发生类型和发育程度1、发生类型：核型：精核与极核受精后，只以核的分裂方式增殖。占61%细胞型：受精后，以细胞分裂方式增殖。混生目型：两种方式混生增殖。2、发育时期：早期：愈伤组织诱导率低旺盛生长期：最容易诱导产生愈伤组织成熟期：诱导率很低。水稻和桑寄生科的一些木本植物例外胚乳培养中，旺盛生长期是取材的最适时期。畸变型细胞染色体异常，植株为多倍体，且不一致，形成多种倍性细胞组成的嵌合体。稳定型继代培养后染色体无变化，植株三倍体三、再生植株的染色体倍数培养胚乳的首要目的是为了直接获得三倍体植株。四、胚乳培养的应用01倍性多样性——筛选非整倍体植株杂种胚乳—附加系和换代系—遗传育种三倍体——六倍体——生产021第三节胚珠和子房培养2胚珠培养3将胚珠从母株中分离出来，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以致形成幼苗的过程。4根据胚珠是否受精分为两类：5受精胚珠的培养6未受精胚珠的培养胚珠培养的过程胚珠的获取培养受精胚珠，摘取授粉时间合适的子房，如培养未受精胚珠，则在授粉前摘取子房。表面灭菌剖开子房壁，取出胚珠或带胚珠的胎座接种。固体培养基，White，Nitsch（普遍使用），MS培养基。附加天然有机物和氨基酸。蔗糖浓度：幼嫩胚珠4-10%，胚珠内含有合子和少数胚乳核5-6%，刚受精的胚珠8%室温26℃，50-60%相对湿度，光照18h，2、培养条件胚珠——种子胚珠——愈伤组织3、受精胚珠的发育将子房从母株上摘下，放在无菌的人工环境条件下，让其进一步生长发育，以至形成幼苗的过程。01授粉子房培养03根据培养的子房是否授粉分为：02未授粉子房培养04二、子房培养第四章胚胎培养及离体授粉了解植物胚培养类型、过程、培养条件，以及胚培养的应用。了解植物胚乳培养过程和培养条件，了解胚乳培养在实践中的应用。认识植物胚珠和子房培养方法及其在生产上应用。具备胚胎培养基本认知，有进行各类胚胎培养的基本能力。目的与要求01胚胎培养是将植物的胚胎与母体分离，培养在已知化学成分的培养基上。一、胚胎培养概念02解决育种中实践中遇到的问题；研究胚胎发育过程中与胚发育有关的内外因素。二、胚胎培养应用：03幼胚培养、成熟胚培养、胚乳培养、胚珠培养、子房培养三、胚胎培养类型第一节胚培养01培养类型所谓胚培养就是采用人工方法把胚从种子、子房、胚珠中分离出来，放在无菌条件下让其进一步生长发育、以至形成幼苗的过程。021、离体胚培养时期2、离体胚培养类型自养期：能在基本的无机盐和蔗糖培养基上生长。异养期：幼胚由胚乳及周围的组织提供养分。成熟胚培养（子叶形成以后）幼胚培养（子叶形成之前）培养过程幼胚培养过程Hanning早在1904年就培养了萝卜和辣根菜的胚，发现离体胚可以充分发育，并且提前萌发形成小苗，这是世界上胚培养最早获得成功的一例。幼胚培养的关键技术：取材时期幼胚剥离培养条件的控制（是否需要特殊处理）成熟或未成熟子房——70%酒精浸数S——0.1%升汞或饱和漂白粉浸10-30min——无菌水冲洗——剖出胚珠——取出完整胚——接种在培养基上。01一般采用固体培养法。（同时配制两种培养基）01培养条件：20-30℃，2000Lx。10-14h01幼胚离体培养的生长发育方式；(1)胚性发育胚只是在体积上增大甚至超过正常胚大小而不能萌发成苗。(2)早熟萌发幼胚不再发育，迅速萌发成幼苗。多数情况一个幼胚萌发成一个植株，有时因细胞分裂形成许多胚状体，进而形成许多植株，即丛生胚现象。(3)愈伤组织多数植物幼胚形成愈伤组织。再分化成胚状体或形成芽苗。种子——95%酒精消毒——选取完好种子——70%酒精浸数S——0.1%升汞或10%次氯酸钠浸泡——无菌水冲洗——种子培养几天——剥离种胚——接种在培养基上。培养条件：黑暗培养、25℃2、成熟胚培养过程三、影响因素（一）培养基1、无机盐成熟胚是含有根原基和茎原基以及一个或两个次生附属子叶。培养时进一步发育产生根和茎，此时在营养上相对独立，只需要提供简单的营养条件，在含有大量元素的无机盐和糖的培养基上即能生长。幼胚则是异样的，要求更复杂的培养基。除了一般的无机盐成分外，还要加入微量元素和生长辅助物质，不同发育时期的幼胚对培养基成份要求不同，胚龄越小培养及成份越复杂。作用：调节培养基渗透压，作为碳源和能源，防止幼胚早熟萌发。成熟胚2%，幼胚8-12%。培