中山大学药学院 生物技术制药课件第3章动物细胞工程制药.pptVIP

第三章动物细胞工程制药

第一节概述

一、动物细胞工程的发展简史

Ø1907年，Harrison首先培养了神经管

区细胞，并观察到从中长出的轴突细

胞(神经纤维)，他的工作被认为是动

物细胞培养开始的标志。

Ø1911年，Carrel发现了鸡胚浸出液对

于细胞培养的生长促进作用，并首次

把无菌技术引入细胞培养技术中。

Ø1950年后Earle等分别建立了Hela等多

种细胞系(cellline)

Ø动物细胞培养从50年代起步，已成为普遍技术

Ø新的核酸技术，免疫，电泳等技术使细胞培养技

术从细胞水平进入分子水平

Ø1986年，传代细胞Namalwa（Burkitt‘s淋巴瘤细胞）

生产的干扰素批准临床

Ø猴肾细胞Vero生产疫苗

Ø1987年，杂交瘤细胞生产抗体

Ø1988年后，传代细胞生产基因工程产品t-PA、EPO、

VIII

二、动物细胞工程制药的基本概念

（一）动物细胞工程制药

Ø目前全世界生物技术药物中使用动物细胞工程生

产的已超过80%，例如蛋白质、单克隆抗体、疫

苗等

Ø动物细胞工程制药包括：

ü培养细胞获得多肽和蛋白药物

ü转基因动物生产疫苗，多肽和蛋白药物

动物细胞培养的产物

疫苗人小儿麻痹症疫苗、狂犬疫苗、风疹疫苗、脑炎疫

苗、疱疹疫苗等

动物牛病毒性腹泻疫苗、牛痢疾疫苗、犬传染性肝炎

疫苗、鸡痘病疫苗、猪霍乱疫苗、牛疫狂犬疫苗、

单克隆抗体IgG、IgM、IgA等

免疫调节剂β-细胞生长因子、INT、白细胞活化因子、血清

胸腺因子、IL、胸腺素、巨噬细胞毒力因子等

酶uPA、Asn酶、胶原酶、P450、纤维蛋白溶酶原激

活剂、胃蛋白酶、胰蛋白酶、Tyr脱羟酶等

激素HCG、EPO、促滤泡激素、GH、促间质细胞激素、

促黄体激素等

Ø动物细胞工程制药所涉及的主要技术领域包括细

胞融合技术、细胞核移植技术、动物细胞反应器，

动物克隆，染色体改造，基因转移，转基因动物

技术和细胞大规模培养技术等方面

Ø最基本的有细胞融合技术、转基因动物技术和细

胞大规模培养技术三项技术

第二节动物细胞的体外培养

Ø（一）动物细胞的类型

Ø1.贴壁依赖性细胞:包括成纤维细胞型，上皮细胞

型。生长于支持物表面。

成纤维细胞型上皮细胞型

ü2.非贴壁依赖性

•也称悬浮细胞

•这类细胞培养时不贴附于

支持物上，可在培养液中

悬浮生长。来源于血液、

淋巴组织，许多肿瘤细胞

等均属于此类。细胞一般

呈圆形。

悬浮细胞

ü3.兼性贴壁细胞

•有些细胞呈现双重性，

既可以贴壁生长，也可

以悬浮培养。如中国仓

鼠卵巢细胞，小鼠L929

细胞。

兼性贴壁细胞

Ø（二）动物细胞培养的环境条件

ü1.温度37,25-28。

ü2.Ph。7.2-7.4酚红

ü3.通氧量，需CO2

ü4.防治污染。支原体、抗生素。

ü5.基本营养物质

ü6.渗透压

Ø（三）动物细胞的培养特征

ü1.比微生物细胞大，无细胞壁，抗机械强度低，

对剪切力敏感，适应环境能力差。

ü2.倍增时间长，生长缓慢，易污染，培养时添

加抗生素

ü3.培养基要求高，易污染。

ü4.培养过程中细胞相互粘连以集群形式存在。

ü5.产物分泌性

ü6.蛋白后修饰

动植物细胞培养与微生物培养性能的相比

项目哺乳动物细胞植物细胞微生物细胞

大小[μm]10～10010～1001～10

悬浮生长可以，多采用贴壁可以，但细胞易聚集可以

营养要求很复杂复杂简单

倍增时间[h]15～10015～1000.5～5

细胞分化有有限分化