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*化学酶工程1、天然酶2、化学修饰酶（1）化学修饰酶的功能基。（2）交联反应。（3）大分子修饰作用。3、固定化酶4、人工模拟酶*二、突变酶
1.突变酶概念定点突变(site-directedmutagenesis,SDM)随机突变(randomandextensivemutagenesis,REM)突变酶：主要采用定点突变的技术产生符合人类设计的”突变型”蛋白*2.定点突变的方法
（1）引物介导的定点突变ACC*Site-directedmutagenesisCAGGTCCAGGCCCAGGCCCAG+polymerase+primerreplicationGCCCGGMutantThrtranslationWildtypeGTCCAGValtranslationOnlyoneaminoacidchangedWildtypeproteinMutantproteinprimer(1)(2)(3)(5)(4)(6)Val→Thr*(2)PCR介导的定点突变ACCCGGGG**（3）盒式突变利用一段人工合成的含基因突变序列的寡核苷酸片段，取代野生型基因中的相应序列。*3.突变酶的应用
（1）提高酶活性及稳定性对活性中心的氨基酸逐个进行突变，找出关键氨基酸进行，得出可信结论*T4溶菌酶和6种设计的变体特性酶氨基酸的位置二硫键的数目相对活性Tm39215497142164(%)(℃)wtαIleIleThrCysCysThrLeu010041.9pwtIleIleThrThrAlaThrLeu010041.9ACysIleThrThrCysThrLeu19646.7BIleCysThrThrAlaThrCys110648.3CIleIleCysThrAlaCysLeu1052.9DCysCysThrThrCysThrCys29557.6EIleCysCysThrAlaCysCys2058.9FCysCysCysThrCysCysCys3065.9wtα：野生型T4溶菌酶；pwt:假野生型酶；A－F：六种设计的半胱氨酸变体；*酵母菌磷酸丙糖异构酶及其变体的热稳定性氨基酸位点酶1478半衰期（min）野生型AsnAsn13变体AAsnThr17变体BAsnIle16变体CThrIle25变体DAspAsn11酶的稳定性以在100℃时半衰期或者失活率来表示。半衰期越长酶越稳定*（2）研究酶的功能基团对靶目标进行突变1.同源序列比较，找出保守区域2.化学修饰3.空间结构信息基础上，进行定点突变*三、酶的分子进化1.定向进化的原理定向进化＝随机突变＋选择*2.定向进化的策略（1）随机突变易错PCR技术(error-pronePCR)DNA改组(DNAshuflling)：随机引发重组(RPR)：1998年,Arn
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