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实验三小鼠骨髓细胞微核试验
1
微核(Micronucleus)的概念
微核的产生与染色体损伤有关，是染色体或染色单
体的无着丝点断片或纺锤丝受损伤而丢失的整个染色
体，在细胞分裂后期遗留在细胞质中，末期之后，单
独形成一个或几个规则的次核，包含在子细胞的胞质
内，因比主核小，故称微核。
2
微核试验(Micronucleustest,MNT)的概念
微核试验是观察受试物能否产生微核的试验。主要可检出
DNA断裂剂和非整倍体诱变剂(染色体损伤)。
传统的微核试验是体内试验，
常用细胞小鼠骨髓多染红细胞(PCE)
3
微核可以出现在多种细胞中，但在有核细胞中较难与正常
核的分叶及核突出物相区别。由于红细胞在成熟之前最后一
次分离后数小时可将主核排出，而仍保留微核于PCE细胞中，
因此通常计数PCE细胞中的微核。
4
微核
断裂剂PCEPCENCE
释放入
成熟
成红细胞外周血
10h10h—H—10h
24-30h
G₁:1.0hS:7.5hG₂:1.5h
时间(小时):0---10--------20--------30
微核形成增加...
对红细胞成熟物延微核开始形成在骨髓中微核微核在外周
迟作用的诱变剂：形成达高峰血中出现
图6-7小鼠骨髓多染红细胞微核的形成(Coleetal,1979,1981)
5
实验步骤
1.实验动物及处理
2.骨髓液的制备和涂片
3.固定
4.染色
5.观察计数
6.结果分析与评价
6
1.试验动物及处理
(1)动物选择：小鼠，分为五组，每组8只
(2)染毒途径：腹腔注射
(3)受试物：环磷酰胺
(4)剂量设计：12.5、25、50、75、100mg/kg
染毒次数及取样时间：一般采用两次染毒或多次染毒。
两次染毒：第一次染毒后24小时进行第二次染毒，
6小时后取样；
多次染毒：每天染毒1次，连续染毒5天，
末次染毒后24小时取样。
7
2.骨髓液的制备和涂片
处死：颈椎脱臼法
处理：取股骨，去掉血污和肌肉，用弯止血钳将骨髓
挤于预先滴有生理盐水的清洁载玻片上，混合均匀后推片
8
3.固定：
将推好晾干的骨髓片
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