中山大学药代动力学实验.pptxVIP

实验一

家兔血浆中头孢呋辛分析方法的建立

;实验目的;实验原理;实验原理;实验操作;按下表取不同体积头孢呋辛储备液于EP管中，用稀释液溶液（甲醇：水=1：1）进行梯度稀释，制备一系列不同浓度的标准工作液（5000μL）。

取6份空白血浆（80μL），加入不同浓度的头孢呋辛标准工作液20μL，对乙酰氨基酚内标液（150μg/mL）10μL，涡旋10s混匀。;按照以下表格制备低、中、高三个浓度的质控标准液。取不同浓度的质控标准液20μL，分别加入80μL空白血浆中，加入乙酰氨基酚内标液（150μg/mL）10μL，涡旋10s混匀。每个浓度制备两份质控样本。;（1）待测样本（标准曲线和质控血浆样本）涡旋10s，加入甲醇300μL，涡旋1min，静置3min。

（2）12000rpm离心5min，取上清液200μL常温真空干燥1~2小时。

（3）待溶剂挥干后，加入100μL甲醇水溶液（水：甲醇=8：2）溶解，涡旋1min，12000rpm离心5min。

（4）取上清液60μL至有内称管的进样瓶（需检查内称管底部是否有气泡，否则底部有气泡影响进样，有气泡需甩一下），进样20μL。;色谱条件;结果记录：

分别记录各浓度标准样品及内标峰的面积。

绘制标准曲线。

数据处理：完成计算获得标准曲线和质控样本的相应数据。;注意事项;实验二家兔头孢呋辛酯/头孢呋辛钠单次给药药代动力学研究（给药与样本采集）;实验目的;实验原理;实验原理;实验原理;实验原理;实验动物的选择原则

一般采用成年和健康的动物。常用动物有小鼠、大鼠、兔、豚鼠、犬、小型猪和猴等。动物选择的一般原则如下：

1.首选动物：在考虑与人体药代动力学性质相关性的前提下，尽可能选择与毒理学和药效学研究相同的动物。

2.尽量在动物清醒状态下进行试验，最好从同一动物多次采样获取药代动力学参数。;3.创新性药物应选用两种或两种以上的动物，其中一种为啮齿类动物；另一种为非啮齿类动物（如犬、小型猪或猴等）。其他药物，可选用一种动物，建议首选非啮齿类动物。在动物选择上，建议采用体外模型比较动物与人代谢的种属差异性，包括代谢反应类型的差异和代谢产物种类及量的差异。通过比较，选取与人代谢性质相近的动物进行???临床药代评价；同时尽可能明确药物代谢的研究对象（如：原形药物、原形药物与代谢产物、或几个代谢产物同时作为药代动力学研究观察的对象）。

4.经口给药不宜选用兔等食草类动物。本实验仍选择家兔作为实验动物的原因是：温顺、体型较大便于操作。

;1.药液配制(已配制）

（1）头孢呋辛酯灌胃液

2.5mg/mL头孢呋辛酯灌胃液：取头孢呋辛酯片(0.25g/片)2片置于研钵中，研成粉末，全部转移至烧杯中，加入200mL水，在磁力搅拌器搅拌状态下，按25mg/kg体重（即10mL/kg，灌胃液体积（mL）/动物体重（kg））量取药液。该浓度药液适用于25mg/kg剂量组灌胃给药。;（2）头孢呋辛钠注射液

12.5mg/mL头孢呋辛钠注射液：取注射用头孢呋辛钠粉针1瓶（1.5g/瓶），用120mL生理盐水溶解并全部转移至烧杯中，按25mg/kg体重（即2mL/kg，注射液体积（mL）/动物体重（kg））量取药液。该浓度药液适用于25mg/kg剂量组注射给药。;

2.动物实验

（1）抓持

（2）编号

（3）称重

（4）动脉留置针的放置

（5）给药与血样采集

（6）血液样本处理;给药与血样采集;耳缘静脉给药;灌胃给药

;3.血液样本预处理

（1）将血液样本置于肝素化试管中；

（2）15000rpm离心5min分离出血浆，将分离出的全部血浆分两份放入新EP管中保存，其中一份100ul，余下的血浆放入另一EP管中，-20℃避光保存至测定。

注意：对EP管进行编号。

;数据记录;注意事项;

8.注意注射器使用的安全；

9.注意动物实验操作的安全；

10.注射器使用后需套上针帽并与针管分离分别放到锐器箱中，勿丢弃于垃圾桶；

11.实验结束处死兔子。

;ThankYou!;实验三家兔头孢呋辛酯/头孢呋辛钠单次给药药代动力学研究（样本测定）;实验目的;实验原理;浓度高于定量上限的样品，应采用相应的空白基质稀释后重新测定。对于浓度低于定量下限的样品，在进行药代动力学分析时，在达到Cmax以前取样的样品应以零值计算，在达到Cmax以后取样的样品应以无法定量（Notdetectable,ND）计算，以减小零值对AUC计算的影响。

;1.溶液配制(已配制）

精密称取对乙酰氨基酚15mg，加入溶液10mL（甲醇：水=1:1）溶解，得浓度为1.5mg