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许多化学试剂均能作为表面灭菌剂使用，原则上应尽可能选择那些灭菌后易于除去或容易分解的试剂。用于植物组织培养的外植体，必须是无杂菌材料。微生物在接触培养基时会大量繁殖，抑制培养物的生长，因此需灭菌处理。植物材料的准备第三节植物细胞培养的基本技术灭菌剂的选择和处理时间的长短取决于所用材料对试剂的敏感性。对灭菌剂敏感的外植体的灭菌时间不宜过长；而不敏感的，灭菌时间则可适当延长。经常使用的灭菌剂如下表。常用灭菌剂的效果比较灭菌剂使用浓度/%去除难易程度灭菌时间/min效果次氯酸钙次氯酸钠过氧化氢溴水硝酸银氯化汞抗生素9~100.5~53~121~210.1~14~50mg/L易易最易易较难较难中5~305~305~152~105~302~1030~60很好很好好很好好最好较好含有无机盐、碳源、有机氮源、植物生长激素、维生素等化学成分。无机盐：包括各种大量元素和微量元素。氮、硫、钾、镁、钙等，它们是细胞的代谢所不可缺少的。碳源：植物细胞培养物通常为异养细胞，因此需要供应有机的碳源例如：肌醇，甘油、乳糖和半乳糖等化合物。二、培养基的及其组成植物生长激素：植物代谢过程中形成的生长调节物质，能调节植物的生长发育，主要加入植物天然生长的五类生长激素（生长素、分裂素、赤霉素、脱落酸和乙烯）及其人工合成的类似生长激素。01有机氮源：蛋白质水解产物或各种氨基酸。02维生素：植物属于自养生物，但本身合成维生素不足，主要加入B族维生素。其它对生长有用的未知复合物：常用的为植物的天然液汁，如椰乳、酵母提取物、西瓜水、苹果水、生梨汁等。它们的作用是提供一些必需的微量营养成分、生理活性物质和生长激素物质等。01按培养对象来说分为：原生质体培养和单倍体培养；02按培养基类型可以分：固体培养和液体培养；03按培养方式分为：悬浮培养和固定化细胞培养。三、培养方法按培养基类型固体培养和液体培养两种方法基本上是在微生物培养方法的基础上发展起来的。所谓固体培养实际上包括利用琼脂作为支撑物的固体培养和固定化细胞培养。如外植体和愈伤组织的培养。液体培养：外植体诱导生成愈伤组织，经过较长时间的多次几代培养后，愈伤组织变疏松，经过震荡后分散为单细胞或小的细胞团，然后接种在液体培养基。但是在液体培养基中，细胞最终要以不均一的细胞团形式出现。3、按培养方式成批培养法：培养基一次性加入反应器，接种、培养一定时间后收获细胞的操作方式。植物细胞培养过程中，次级代谢产物的大量累积往往发生在细胞生长的稳定期，基于此原理设计了植物细胞的两步培养法，即使用两个生物反应器，第一个反应器用于细胞生物量的累积，第二个反应器用于次级代谢产物的生产。大规模培养第四章植物细胞工程制药植物细胞工程:以植物细胞为基本单位,应用细胞生物学,分子生物学等理论和技术，在离体条件下进行培养，繁殖或人为的精细操作，使细胞的某些生物学的特性按人们的意思发生改变,从而改良品种,制造新品种,加速繁育植物个体或获得有用物质的一门科学或技术.高等植物次级代谢产物极其丰富多样，除药用之外，许多次级代谢产物还是食品、化工和农业化学的重要原料。1植物生长缓慢，受气候影响，即使是大规模的人工栽培仍然不能满足需要。2一方面通过化学合成的方法来生产，另一方面通过植物细胞培养方法来生产。目前成功培养的药用植物细胞：人参、长春花、紫草、甘草等。0102第一节基本概念01第二节植物细胞的形态和生理特性02第三节植物细胞培养的基本技术03第四节影响植物次级代谢产物累积的因素04第五节植物细胞培养的生物反应器05第六节进展与展望06第七节植物细胞制药实例07内容第一节基本概念全能性高低:受精卵＞胚胎干细胞＞生殖细胞＞体细胞植物细胞＞动物细胞植物细胞的全能性：植物体中任何一个具有完整细胞核的细胞，在一定条件下都可以重新再分化形成原来的个体。植物组织和器官培养：在无菌和人工控制条件下（培养基、光照、温度），研究植物的细胞、组织和器官以及控制其生长发育的技术。进行植物组织培养，一般要经历以下五个阶段：外植体的选择及培养。诱导去分化阶段。继代增殖阶段。诱导分化生根成芽阶段。移栽成活阶段。植物组织培养的基本过程外植体愈伤组织胚状体已分化出根、芽分化程度降低，分裂能力增强重新分化出组织器官的过程（细胞分裂素、生长素）细胞分化程度与细胞分裂能力呈负相关脱分化遮光再分化光照外植体：是指用于植物组织细胞培养的器官或组织的切段，植物的各个部位如根、茎、叶