《化妆品舒缓功效测试-体外皮肤角质形成细胞炎症因子测试法》征求意见稿.pdf

ICS71.100.70

Y42

团体标准

T/GDCQMA001-XXXX

化妆品舒缓功效测试

-体外皮肤角质形成细胞炎症因子测试法

（征求意见稿）

20XX-XX-XX发布20XX-XX-XX实施

广东省化妆品质量管理协会发布

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化妆品舒缓功效测试

—体外皮肤角质形成细胞炎症因子测试法

1范围

本标准规定了体外皮肤角质形成细胞炎症因子测试法的应用范围、规范性引用文件、术

语和定义、试验基本原则、试验方法、试验结果以及结果报告等。

本标准适用于化妆品原料及产品潜在的舒缓功效的筛选及检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。

GB/T27578化妆品名词术语

3术语与定义

GB/T27578以及下列术语和定义适用于本文件。

3.1舒缓Soothing

有助于改善皮肤刺激等状态。

3.2酶联免疫吸附剂测定Enzymelinkedimmunosorbentassay

将可溶性的抗原或抗体结合到聚苯乙烯等固相载体上，利用抗原抗体特异性结合进行免

疫反应的定性和定量检测方法.

3.3肿瘤坏死因子-αTumornecrosisfactor-α

主要由活化的单核/巨噬细胞产生，能杀伤和抑制肿瘤细胞的细胞因子。促进中性粒细

胞吞噬，抗感染，引起发热，诱导肝细胞急性期蛋白合成，促进髓样白血病细胞向巨噬细胞

分化，促进细胞增殖和分化，是重要的炎症介质，参与某些自身免疫病的病理损伤。

3.4白细胞介素-6Interleukin-6

属于白细胞介素的一种。由纤维母细胞、单核/巨噬细胞、T/B淋巴细胞、上皮细胞、

角质细胞以及多种细胞产生。能够参与免疫反应,刺激免疫细胞增殖、分化并提高其功能。

4试验原理

舒缓是指有助于改善皮肤刺激等状态。皮肤刺激状态常伴随敏感性皮肤而出现，敏感性

皮肤的发生是一种累及皮肤屏障、神经血管、免疫炎症的复杂过程。其中，皮肤免疫炎症反

应是引起皮肤刺激状态的重要因素。皮肤免疫炎症反应是在内、外因素的作用下，皮肤屏障

功能受损，引起感觉神经传入信号增加，使皮肤对外界刺激的反应性增强所致。在外界环境

因素或内部生理因素刺激下，皮肤角质形成细胞分泌TNF-α，进而促进细胞氧化应激和炎

症反应。IL-6作为典型的促炎因子，其主要功能为刺激T淋巴细胞及B淋巴细胞的生长

与分化，诱导细胞毒性T淋巴细胞产生急性期反应蛋白，促进炎症反应。因此，IL-6可直

接反映机体炎症情况。

本方法使用TNF-α诱导人永生化角质形成细胞建立细胞炎症模型，采用化妆品原料处

理细胞炎症模型后，利用酶联免疫吸附剂测定法检测细胞分泌的IL-6含量，根据IL-6的

表达改变判断化妆品原料改善皮肤刺激状态的能力。

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5试验方法

5.1仪器和设备

移液枪（量程：1000μL、200μL、20μL、10μL、2μL）；CO2培养箱；酶标仪；超

净工作台；微量振荡器；分析天平（精度：0.1mg）；涡旋震荡器；细胞计数仪或血球计数

板；倒置显微镜；低速离心机；超低温冰箱（-80℃）。

5.2主要试剂及耗材

DMEM高糖培养基；胎牛血清；青链霉素；胰蛋白酶/EDTA溶液；重组人TNF-α；

磷酸盐缓冲液（PBS）；